Genetiske Protokoller

Genomisk DNA gir oppskriften for cellene å organisere inn i levende organismer . DNA inneholder fire gjentatte nitrogenbaser kalt adenin , guanin , cytosin og tymin . Forskere har nå fastslått at hele basesekvensen , genomet , mange komplekse organismer , inkludert mennesker . Det er mange viktige grunner til å sekvensere et genom . Medisinsk genetikk er opptatt med oppdagelsen av genetiske avvik forårsaker sykdommer som diabetes , Alzheimers og kreft . Evolusjonære genetikere sammenligne genomer fra beslektede arter å utvikle nøyaktig taksonomi . Basis genetiske protokoller i forskning er den samme uansett den hensikt forskning. Isolering av DNA fra celler

Genetisk forskning krever utvinning av en ren DNA-prøve fra celler . En grunnleggende protokoll begynner ved opprivning og å fjerne beskyttelsesplantecelleveggereller dyrecellemembranermed et enzym kalt lysozym . Ikke- genetisk cellekomponenter i form av bunnfall blir fjernet ved hurtig roterende med en sentrifuge mens DNA forblir i oppløsning . DNA blir deretter felt ut i nærvær av natrium- acetat- salt med etanol. Endelige sentrifuge utfellinger og pellets rent genetisk materiale til forskningsformål .
Polymerase Chain Reaction

Genetisk forskning krever tilstrekkelige kopier av bestemte DNA regioner . The Polymerase Chain Reaction , eller PCR , er en fremgangsmåte for fremstilling av eksponentielt kopier av DNA. Protokollen krever renset DNA , Taq polymerase , baser kalt deoksynukleotider og små DNA strengene for å prime det angitte området . Reaksjonsblandingenanbringes i en thermocycler , et instrument i stand til å raske temperaturendringer . Oppvarming av blandingen til 95 grader Celsius skiller dobbelt-trådet DNA, så avkjølt til 48 grader, slik at primerne kan sitte eller anneal , å matchende baser. Temperaturen økes til 72 grader når Taq polymerase setter sammen deoksynukleotider , kalt forlengelse , inn i en ny kopi av DNA .
Genetisk DNA Sekvense
Sekvense data vises som fargede band designa DNA-baser .

Automatisert sekvensering brukes til å fastslå eksakt basesekvensen og sammenligne vanlig med unormal DNA . Protokollen legger fluorescensmerkede dideoxynucleotides eller ddNTPs , til normale PCR reaksjoner, som tilfeldig stopper utvidelsen av DNA- fragmenter . Produktene er forskjellige DNA-fragmenter ved et enkelt sted . Hver basetype har en annen farge. Sluttproduktene er lastet på en automatisert sekvenseren , et instrument utformet for å skille fragmenter av størrelse på en polymer ved hjelp av elektrisk strøm. Når fragmentene nå polymer endepunkt , et digitalt kamera registrerer grunnfarge og sender dataene til datamaskinen for analyse .
Genotyping og DNA fingerprinting
DNA fingerprinting brukes til å identifisere menneskelige gjenstår .

genotyping er en fremgangsmåte som sammenligner små segmenter av et genom fra en organisme til en annen. Målet er å oppdage små forskjeller i PCR fragment størrelse som følge av normale eller tilfeldige grunn ved endringer i DNA . Den protokollen design begynner med grunnleggende PCR ved hjelp av en fluorescerende - merket primer for deteksjon på automatiserte sequencere . Merkede produkter er atskilt med størrelse og innspilt av digitalt kamera til en datamaskin for analyse . Genotyping protokoller er designet for rettsmedisinsk identifikasjon , DNA fingerprinting og farskap eller identifikasjon av genetiske misdannelser som resulterer i sykdom .