Slik Flekk agarosegeler

Visualisering av nukleinsyre eller protein er viktig ved utførelse av agarose- gel -elektroforese . Hvis du jobber uten flekker gel , vil du ikke være i stand til å se hvor prøven du tester har nådd , og derfor målinger av molekylær størrelse , for eksempel , vil bli sterkt begrenset . Sette flekker på gel ved hjelp av et vanlig , godt utprøvd fargestoff som etidiumbromid ( EtBr ) som fluoresces under ultrafiolett ( UV ) lys når Pilgrim i DNA eller RNA-molekyler . Fargestoffet vil hjelpe deg i å utføre eksperimentet ved å dukke opp molekylene i prøven som mørke blå merkene . Du trenger arkivvernehansker og vernebriller
agarosegel
Etidiumbromid
Pipette ( Gilson for små mengder)
Loading buffer på
Vis flere Instruksjoner

1

Bruk vernehanskersom er tynne , men beskyttende og la fingrene og hendene frie bevegelse . Bruk en liten pipette å trekke noen EtBr ( eller tilsvarende flekk ) ut av beholderen .
To

Legg 0,5 mikrogram per milliliter av den valgte flekken til prøven din . Dekk til prøven og bland manuelt. Flere rister bør være tilstrekkelig .
3

Legg et negativt ladet lasting buffer til blandingen ved hjelp av en pipette . Dette gjør det mulig for farget prøven som skal sees med det blotte øye , i naturlig lys og eliminerer behovet for kostbar , skadelig UV som ellers ville fornedre molekylene som du er interessert . Xylen cyanol er et vanlig lasting buffer , men andre er tilgjengelige . Sørg for at du velger en laste buffer som vil kjøre i samme hastighet som molekylet du måler . Xylen cyanol kjører på samme hastighet som DNA-fragmenter som er 5000 basepar (bp) i lengde .
4

Bruk en ren pipette å bruke din utvidede prøven til brønnene i starten av din agarosegel . Volumet du bruker , avhenger av størrelsen på gel Combs (vel tykkelse og lengde og gel tykkelse) . Sette flekker på prøven og ikke kontroll , slik at du kan bestemme parametrene du er interessert i (for eksempel molekylvekt ) riktig og effektivt .
5

Alternativt utføre Southern Blotting som en måte å visualisere prøven din . Overfør DNA til en nitrocellulosemembran. Medfører hybridiseringsprobe . Dette er ikke flekker , som sådan , men gir et egnet alternativ , som beskrevet av tilgang Excellence .