Hvordan forberede Agar Plates

Molekylærbiologi og bakteriologi bruk agar plater til kultur mikroorganismer som bakterier for eksperimentering . Den agar er det middel som stivner , eller geler , et flytende næringsmedium som kreves av mikroorganismen til å overleve og vokse. Når overført til en agar plate, bakteriene vokse inn i distinkte kolonier ( hvis dyrket ved lav konsentrasjon ) eller utstryk ( hvis dyrket i høye konsentrasjoner ) og kan bli høstet for analyse. Biologer forberede agar plater , som prosessen krever tilgang til laboratorie - grade reagenser og maskiner og en god forståelse av molekylærbiologi og sterile teknikker . Du trenger arkiv Hansker
Lab frakk
Ansiktsmaske
bunsenbrenner
laminær hette
Sterile petriskåler
10g Bacto - trypton
5g gjær ekstrakt
15g agarose
1 ml 1N NaOH
Sterilt destillert vann
Glass flaske
Autoclave tape arkiv Autoclave
Kosttilskudd , f.eks antibiotika som ampicillin
Vis flere instruksjoner

en

Ta på riktig verneutstyr , inkludert hansker , en lab frakk og munnbind , og decontaminate alle overflater . Arbeidet ved siden av en Bunsen -brenner eller fortrinnsvis i et sterilt laminær strømningshette . Dette hindrer luftforurensning fra å falle inn i agar .
To

Fjern bunken med petriskåler fra emballasjen , men sparer for nedpakking agarskålene . Merk den ytre overflaten av formen ( ikke lokket ) med typen agar og dato for preparatet . Legg platene ut som et enkelt lag med lokkene fjernet for å gjøre fylling av agar enklere.
3

Bland Bacto - trypton , gjærekstrakt og agarose sammen og deretter legge den natriumhydroksid ( NaOH ) løsning . Legg sterilt destillert vann for å oppnå 1L næringsmedier . Overfør løsningen til en glassflaske med minst 1,5 l volum. Løst skru på lokket av flasken og etiketten datoen for tilberedning og navnet på media . Plasser en strimmel av autoklav tape på flasken og det autoklav i 25 minutter . La flasken avkjøles til ikke lavere enn 45 ° C. (eller den vil stivne for tidlig ), men ikke høyere enn 50 grader Celsius. Du kan lagre flasker med avkjølt og størknet agar på 4 grader Celsius , og deretter varme til flytende . Ved behov for spesielt eksperiment eller stamme av bakterier , legge til riktig type og mengde supplement som antibiotika . Hvis media er for varmt, vil tilskuddene bli ødelagt , så nøye kontrollere temperaturen i media før du fortsetter .
4

Hell et tilstrekkelig volum av agar til halv fylle fatet mens agar er fortsatt varm og flytende . Sørg for at overflaten er helt dekket . Ikke hell en overdreven mengde eller la agar nå toppen av parabolen . Hold platene i en steril atmosfære ved at Bunsen -brenner eller laminær strømningshette til å løpe kontinuerlig. La platene for å stille og sett lokkene .
5

Tørk agarskålene i ca 30 minutter til en time i en ovn satt ikke høyere enn 37 grader Celsius . Alternativt kan du la dem i laminær hette i tre minutter eller på en dekontaminerte laboratoriebenken i en lav trafikk område som ikke er trekkfulle for en dag eller to . Tørking platene stopper noen bakteriell løsning plassert på agar overflaten fra bare fortynne ut og sklir av , i stedet for å danne kolonier som festes på agar .
6

lagre forsiktig platene i mørket og på fire grader Celsius . Stable tørket agar plater med sine bunner opp slik at du kan tydelig se etikettene og for å hindre mikroorganismer og rusk fra å falle på agar overflaten og forurenser dem . Sette retter tilbake i sin emballasje , dekk med aluminiumsfolie og tape emballasjen lukket . Merke pakket plater med sitt innhold og dato for forberedelse . Du kan lagre platene i opptil to måneder, og bør forkaste dem etter det .