Parafin Embedding Protocol

Forskere trenger vanligvis å stivne biologiske prøver til seksjon dem av . Dette gjør det lettere for forskere å legge fargestoffer, antistoffer og prober for den biologiske prøven. Det reduserer også overlapping av ulike cellelagene . Forskere bruke paraffinvoks som en hard matrise for kutting , siden parafinen ikke blander seg med vann. Parafin er en type hydrokarbon. De biologiske prøvene inneholder vann, så forskerne må dehydrere prøvene ved hjelp av stadig mer konsentrert etanol bad. Xylen

Forskere fjerne etanol ved hjelp av xylen . Deretter bruker de smeltet parafinvoks for å fjerne xylen . For lysmikroskopi , parafin seksjoner er vanligvis fem mikrometer tykt . Parafinvoks er ikke vanskelig nok for tynnere skiver . Forskere rehydrere i vevet ved hjelp av xylen først, deretter etanol. Så skyll den biologiske prøven med destillert vann for å unngå forurensning .
Fixing

parafininnstøpte vev er vanligvis fast bruker nøytral bufret formalin , som er den kommersielle versjonen av formaldehyd. Dette inkluderer paraformaldehyd og metanol , noe som hindrer at formaldehyd fra å konvertere til maursyre . Tynne skiver vev trenger 48 timer med fiksering ved romtemperatur for optimal histologi , som er studiet av mikroskopiske anatomi. Ellers vil vevet herde og bli sprø . Før behandling, er det vevet som regel lagret i 70 prosent etanol ved en temperatur på 4 grader Celsius .

Parafin Prosessorer

Forskere ofte bruker parafin prosessorer til å sende vevet gjennom bad som gradvis dehydrerer materialet før varm parafin kan gå inn gjennom vev . Forskere kjøre prosessoren over natten . Prosessoren bare varmer opp vevet i en viss tid avhengig av vev slik at det ikke blir hardt og sprøtt . Prosessoren bruker et vakuum som gir raskere gjennomtrengning av parafin og fjerner luftbobler . Etter behandling blir vevet lagret i kassetter ved romtemperatur.
Wax Smelte

parafin smelter i en time før tilsetning av vev. Det hele kassetten er plassert i en 65 grader Celsius paraffin -bad i 15 minutter. En kald aluminium kjøleribbe kjøler paraffinvoks i 20 minutter. Når voks sprekker eller vev ikke er riktig justert , smelter forskeren parafinen og gjentar prosessen .
Cutting

Når seksjonering vev , får forskeren i vannbad til 35 til 37 grader Celsius. Vannet er frisk og deionisert . Blokkene er plassert med forsiden ned i en is blokk eller kjøleribbe i 10 minutter. Et blad skjærer blokken i seksjoner. To problemer som kan oppstå er dårlig ribboning og fragmenting prøver. Når prøvene fragment , vannet for varmt. Om blokken ikke båndet godt , bør du sette den tilbake på isen blokk og firmaet opp voks før du starter på nytt .