Intracellulær Fargings Protokoll for Flow Cytometry

Flow cytometry er et verktøy som er anvendelig i studiet av celleproteiner . Det benytter emisjon av lys eller fluorescens fra proteinene i cellen . Antistoffer eller prober merket med fluorescens blir brukt til å studere bestemte proteiner. Strømningscytometri er brukt for å diagnostisere en rekke sykdommer , inkludert kreft , men er også nyttige i medisinsk forskning. Feste Cells

Cells skal være løst for å opprettholde stabiliteten i de intracellulære proteiner . En rekke fiksativ kan brukes , for eksempel formaldehyd eller iskald aceton. Etter fiksering, må cellemembranen for å bli permealized for å tillate antistoffet å gå inn i cellen. Vaskemidler som Triton eller NP - 40 , kan eller iskald metanol brukes til å lage hull i cellemembranen .
Farging arkiv

Vask cellene i blokkering buffer 0,5 prosent bovint serumalbumin fortynnet i fosfatbuffret saltvann , BSA /PBS. Celler blir inkubert i blokkeringsbufferfor å redusere ikke-spesifikk binding . Legg primært antistoff fortynnet i blokkeringsbufferog la inkuber ved romtemperatur, for optimalisert tidsrom. Vask med blokkering buffer .
Analyse

Inkuber sekundært antistoff , som er merket med et fluorescerende tag , ved romtemperatur i 30 minutter . For å fjerne ubundet antistoff vaske celler i blokkering buffer . Spin celler i en pellet og deretter resuspender i PBS og analysere på flowcytometer .