Cell Lysis Protokoll for Protein Isolation

små proteiner kan fremstilles syntetisk , men for mange grunner er det ingen syntetiske maskineri bedre enn cellen selv. Vanligvis , det første trinnet i protein isolasjon er cellelyse . Cellelysis
I cellelyse , membranen rundt cellen brudd .

Ordet " lyse " kommer fra en gresk rot som betyr " å løsne . " I cellelyse , er de krefter som holder cellemembranen sammen forstyrret, forårsaker den til å briste . Innholdet i cellen blir deretter sluppet ut i den omkringliggende løsningen , inklusive for proteinet av interesse . Vanligvis er dette gjort ved tilsetning av en kjemisk løsning kalt lysis buffer .
Forbereder Lysis Buffer
Valget av lysis buffer vil være avhengig av celletype , protein og programmet .

Et utall forskjellige lysis løsninger er tilgjengelige kommersielt , eller vanlige oppskrifter kan bli anvendt for å frem lysis buffer fra vanlige kjemikalier . Den beste buffer til bruk , vil variere avhengig av hvilken celletype som brukes , er proteinet som skal isoleres og den endelige anvendelse , men , generelt, inneholder en lysis -løsning en detergent molekyl (ofte NP- 40 eller Triton -X) som går i oppløsning i cellen membran , sammen med buffere, kelater og proteasehemmere å hindre proteinet blir skadet en gang sluppet fra den beskyttende miljø av cellen .

Lyseringsfor betingelser
Performing lyse henhold iskalde betingelser forhindrer skade på proteinet av interesse.

Lysis buffer er vanligvis brukt iskald , og lyseprosessentillates å forløpe under kalde forhold . Oppløsningen ble forsiktig rystet for å oppmuntre til og dispersjon av cellene og lysis produkter. Etter omtrent 5 til 10 minutter , blir den lyseringsløsningsom regel nøytraliseres for å hindre ytterligere aktivitet. Disse forholdsregler for å redusere skade på proteinet og redusere mengden av overflødig avfall som produseres , som senere må fjernes.
Andre Lyseringsfor Metoder
Mekanisk styrke kan også benyttes for å lysere celler.

Selv om kjemisk lysis er den mest skånsomme og mest brukte , kan strengere mekaniske metoder for å lysere cellene benyttes i noen tilfeller. Disse omfatter sonikering , gjentatte fryse-tine -sykluser , og homogenation , som er en mose prosess. Se teknisk litteratur for å finne den mest hensiktsmessige metoden for ditt spesielle tilfelle .