Biotinylering Protocols

2013/12/15

Biotinvlerina er prosessen med å koble biotin, eller vitamin H , til et protein eller andre molekyler . Denne vitenskapelige prosedyren er mest brukt i bioteknologi og molekylærbiologi forskning som involverer DNA , proteiner og antigener , som er molekyler kroppens immunsystemgjenkjenner som inntrengere . Biotinylering protokoller inkluderer biotinylering av antistoffer og peptider , så vel som celleoverflate biotinylering . Biotinylering av Antistoffer

vil koble biotin til antistoffer proteiner produsere når et antigen kommer inn i kroppen , teknikere bruke natriumbikarbonat ( NaEC03 ) ved pH 9 ; dimethylsulfoxyd ( DMSO ) ;

NHS - Biotin og en salt stoff kalt PBS . Prøver ble blandet med natrium-bikarbonat , som senere tilsettes til NHS -biotin i DMSO . Oppløsningen ble deretter tilsatt til de analyserte antistoffer og inkubert på en del av utstyret som kalles en rotator i fire timer ved romtemperatur eller over natten ved 39,2 grader Fahrenheit. Til slutt ble løsningen fortynnet med PBS.
Cell Surface Biotinvlerina

celleoverflaten biotinylering protokollen, teknikere bruke vevskultur , fosfat -bufret saltvann (PBS ) ved pH 7,4 og sulfosuccinimidyl -2-( biotinamido )-etyl -1 ,3- ditiopropionat bufferoppløsning for å balansere syre inneholdende aminogrupper og TrisCl ifølge Current Protocols i Protein Science.The celler blir blandet med biotin og bufferoppløsningen , dekantert og sentrifugert . Solid innhold og spesifikke proteiner er senere analysert på en gel elektroforese plate .
Biotinvlerina av Peptider

å utføre biotinylering av peptider , reagensen brukes er NHS - SS Biotin , ifølge Philip Shepherd i " monoklonale antistoffer : . en praktisk tilnærming " Peptider er korte fragmenter av aminosyrer, de molekyler som danner proteiner og DNA. I denne protokollen, er den kommersielle løsning NHS -SS Biotin oppløst i vann. Deretter peptid prøve ble tilsatt til den, sammen med natrium- bikarbonat for å balansere surhetsgrad eller pH. Oppløsningen ble deretter incubert på is i to timer. Teknikere kan observere prøven med eller uten biotinmolekyler .