Forskjellen mellom direkte og Indirekte ELISA

An enzyme -linked immunosorbent assay (ELISA) innebærer omsetning av en antistoff-enzymkompleksmed et antigen eller antistoff holdt immobil på en fast overflate . Ved inkubasjon av det konjugerte enzym med et egnet substrat , er et produkt som dannes . Dannelsen av et produkt som bidrar til å påvise tilstedeværelse av antigen eller antistoff , og dets mengde er et mål for mengden av antigen -antistoff- reaksjon som fant sted. ELISA- testen kan bli utført i to former: direkte og indirekte . Test Format

I direkte ELISA -test , er en primær antistoff holdt på veggene i en mikrotiterplate . Når prøven mistenkes for å inneholde antigenet blir tilsatt , er en antigen- antistoff-reaksjon . Deretter blir en enzym-bundet sekundært antistoff som er i stand til å reagere med antigenet tilsatt . Dersom antigenet er tilstede i prøven , bindes det til denne enzym-bundet antistoff. Når et farveløst substrat tilsettes , dersom en farge utvikler seg , betyr det at tilstedeværelsen av antigen. I den indirekte ELISA , blir antigenet holdes på veggene i mikrotiterplate . Når en prøve mistenkt for å inneholde antistoffer som er lagt til, oppstår det en antigen- antistoff-reaksjon . Deretter blir en enzym-bundet sekundært antistoff i stand til reaksjon med det ubundne region av antistoffet tilsettes . Når fargeløs underlaget er lagt , det fører til utvikling av farge hvis prøven brukes inneholder antistoffer .
Enkel Testing

Et bredt spekter av merket sekundære antistoffer er kommersielt tilgjengelig. Dessuten er det mulig å lage flere primære antistoffer i en gitt art og bruke samme sekundært antistoff for påvisning . Dette gjør den indirekte ELISA lett å utføre. I den direkte ELISA , de primære antistoffene har til å være spesielt forberedt til å reagere med det spesifikke antigen mistenkes å være til stede i prøven. Dette gjør den direkte ELISA ufordelaktig sammenlignet med indirekte test .
Rapidity av Testing

direkte ELISA -testen er rask i forhold til den indirekte testen fordi det bruker bare et enkelt antistoff . Den indirekte ELISA krever et ekstra trinn med inkubasjon med andre antistoff under testprosedyren, noe som fører til en forsinkelse i å få resultater .
Følsomhet

direkte ELISA -testen er mindre følsom enn den indirekte form av testen fordi det er mye mindre signalforsterkning . Dessuten kan merking av det primære antistoff med et enzym svekke dens immonoreactivity profil. Ved den indirekte ELISA , er det primære antistoffet ikke er merket , og derfor beholder sin immunoreaktivitet . Dessuten har hver primære antistoff flere epitoper som kan binde med det sekundære antistoff , og dette tillater forsterkning av signalet , å forbedre metodens følsomhet. Imidlertid er det en sjanse for kryssreaktivitet mellom antigen og det sekundære antistoff , fører til en feil i resultatene. Det finnes ingen slik mulighet i direkte ELISA -metoden .