Metoder for måling av NADPH - oksidase

er enzymet NADPH oksidase identifisert som en produsent av reaktive oksygen arter under prosesser, inkludert vekst av vaskulære glatte muskelceller . Disse reaktive arter er knyttet til en rekke sykdommer innbefattende hypertensjon, diabetes , kreft og inflammasjon , fremgangsmåter for overvåkning av aktiviteten til dette enzym er kritisk for utvikling av mulig behandling . NADPH oksidase

NADPH oksidase tilhører en familie av enzymer som hjelper med elektronoverføring mellom NADPH og oksygen . Imidlertid har NADPH oksidase den unike evne til å produsere reaktive oksygenforbindelser fra denne reaksjonen , sammenlignet med andre familiemedlemmer , hvor reaktive oksygenforbindelser genereres på andre måter . En multimeric protein kompleks , består av membranbundet flavocytochrome b558 , som brukes som måle markør NADPH oksidase .
Reaktive oksygen arter ( ROS ) Generation
p Som den viktigste kilden til ROS, spesielt hydrogen peroxide , produserer NADPH oksidase små , ​​men konsistente mengder via sin isoform uttrykt i blodkar , som er involvert i signalering prosesser . Dette konsistent produksjon etter hvert kan overvelde naturlig antioksidant systemet , forårsaker et tap av beskyttende forbindelser som for eksempel nitrogenoksid , og generering av enda kraftigere ROS .
Chemiluminescence Method

Chemiluminescence muliggjør meget følsom og automatisert måling av NADPH oksidase aktivitet over et område av konsentrasjoner . I løpet av denne fremgangsmåten blir NADPH substrat tilsatt til en vevsprøve inneholdende NADPH oksidase . Ved reaksjonen blir ROS genereres og reagerer med forbindelsen lucigenin å produsere en chemilluminescent effekt, som blir målt. Luminescence er direkte proporsjonal med NADPH oksidase -aktivitet , som enzymet bestemmer reaksjonshastigheten .
Kinetisk undersøkelse via Flow Cytometry

I denne metoden, blir vevsprøver analysert via flowcytometri . Benmarg er adskilt fra prøven ved hjelp av Hanks ' Balanced Salt Solution. Spesifikke flekker og påvise antistoffer tilsettes til prøven i polystyren-reagensrør . Prøven blir deretter inkubert , ble vasket med Hanks ' Balanced Salt Solution, merket med molekylære prober og fremstilt av strømningscytometri. Kontrollrør er også laget for sammenligning og for å kalibrere strømningscytometer . Maskinen er så løp og målinger registrert .