Kloramfenikol Plate Forberedelse

Kloramfenikol er et bredspektret antibiotikum som dreper bakterielle mikrober ved å forstyrre deres evne til å gjenskape. Dette antibiotika ble utviklet i første omgang å bekjempe infeksjoner hos mennesker , men ifølge Drug.com , det er kun brukt nå , som i denne publikasjonen , som en siste utvei når andre legemidler ikke fungerer på grunn av alvorlige bivirkninger som for eksempel aplastisk anemi , hypoplastisk anemi , trombocytopeni og granulocytopeni . Kloramfenikol er nyttig i et forskningslaboratorium for molekylærbiologi eksperimenter . Når kloramfenikol ble fremstilt på en plate, kan den brukes for å påvise bakteriekonsentrasjoneneller for å isolere spesifikke bakteriestammer for videre eksperimenter . Du trenger
Destillert vann
Kloramfenikol
1,0 prosent trypton
0,5 prosent gjærekstrakt
1,0 prosent natriumklorid ( NaCl ) pH 7,0
95 prosent etanol
Agar
2 - liters kolbe
Magnetic røring plate
Mellomstore magnetisk stirbar
Latex eller nitrilhansker
Laboratory skala
Autoclave
30 sterile 10 cm plater
blå tusjpenn
Parafilm
Aluminiumsfolie
Autoclave tape på
Vis flere instruksjoner
en

Sett på et par av latex eller nitrilhansker å forberede LB buljong . LB-næringsløsning er en vanlig forkortelse for Lysogeny buljong eller Luria broth , og det er som benyttes som vekstmedia for dyrking av bakterier. Det kan gjøres fra grunnen av i laboratoriet , eller for å spare tid det kan kjøpes fra noen molekylærbiologi lager leverandøren .
To

Plasser et ark av veiepapir på skalaen . Trykk på knappen for nullstilling på skalaen , slik at vekten av papiret ikke er inkludert i den endelige vekt. Legg små mengder trypton om gangen , helt til du når 10 g . Brett deretter veie papiret i to med trypton i sentrum . Plukk opp den veie papir og nøye bruke brettet papir som en trakt for å legge til trypton til 2 L kolbe . Følg denne fremgangsmåten for å veie 5 g gjærekstrakt , 10 g NaCl , og 15 g agar .
3

Slipp oppsikt bar i flaska og sentrere kolben på den magnetiske oppsikt plate . Legg nok destillert vann for å få løsningen opp til en liter .
4

Snu stir plate på , og se oppsikt bar . Platen bør settes på riktig hastighet for å tillate oppstuss linjen for å gå i moderat tempo uten å bli sittende fast på sidene av kolben. Juster innstillingene om nødvendig . Tillat løsningen å sitte på plate inntil alle reagensene er oppløst .
5

Slå av røreplaten, og strekke en 3 tommers firkantet stykke parafilm over toppen av kolben , for å dekke og beskytte kolben fra eventuelle forurensninger eller renner . Deretter dekker Parafilm med et stykke aluminiumfolie og legge til en del av merke autoklav tape på toppen av folien.
6

Plasser løsningen i en autoklav på væsken sykle i 20 minutter ved 15 psi i sterilisere den .
7

Fjern kolben fra autoklaven . Det vil være veldig varmt . La løsningen avkjøles til ca 55 grader celsius , ved å la den ligge i romtemperatur , eller ved å plassere flasken i en 65 - grader celsius vannbad .
8

Spray og tørk ned arbeidet overflaten med 95 prosent etanol for å hindre forurensning. Det er også en god idé å endre hansker før du håndterer platene .
9

Mark siden og lokket på hver plate med vertikale blå bånd ved hjelp av tusjpenn . Dette indikerer at platene inneholder LB buljong og kloramfenikol .
10

Legg nok kloramfenikol antibiotika til løsningen slik at konsentrasjonen når ønsket beløp, avhengig av bakteriene du skal jobbe med . En felles endelig konsentrasjon er 100ug/ml . For denne konsentrasjonen , legge 1 ml kloramfenikol lager ( på 25mg/ml ) . Virvle kolbe i en sirkulær bevegelse , eller legg den tilbake på magnet stir plate i 1 til 2 minutter for å sørge for at det er godt blandet .
11

Tørk ned munningen av flasken med etanol , og deretter helles oppløsningen inn i platene , til de er fylt halvveis med løsningen. La platene stivne , dekke hver tallerken med et lokk , og oppbevar dem opp-ned på 4 -graders celsius for å hindre dem fra å tørke ut .