Hvordan lage LB agar plater

Agar er en geléaktig substans , produsert fra røde alger og brukes til en rekke formål . En av de vanligste bruksområdene er som en dyrkning medium for bakterier . LB agar er næringsagar som er blitt kombinert med lysogeny buljong (LB) . Det er en vanlig holdt feilslutning at LB står for Luria - Bertani . Men dens oppfinner , Giuseppe Bertani , sier i sitt notat " Lysogeny ved Mid - Twentieth Century : P1 , P2 , og andre eksperimentelle systemer , " at initialene var alltid ment å stå for lysogeny kjøttkraft , ikke hans navn, og at hans coresearcher , Salvador Luria . LB agar er allsidig og ganske enkel å lage. Du trenger
For 1 L av ferdig medium : en Scale og veier papirer eller skuffer
1 - L uteksaminert sylinder
en L destillert eller avionisert vann
2 - L Erlenmeyerkolbe
10 g trypton
5 g gjærekstrakt
5 g noniodized bordsalt
15 g agar
Aluminiumsfolie
Vanntett ovnen votter
Autoclave eller trykkoker arkiv Steril Petri plater på
Vis flere instruksjoner

en bruk en Erlenmeyerkolbe som rommer to ganger volumet av mediet du har tenkt til å forberede seg.

Plasser trypton , gjærekstrakt og salt i erlenmeyerkolben .
2 Følg nøye med på trykket av autoklav eller trykkoker når sterilisering .

Tilsett destillert eller avionisert vann og sir eller riste å oppløse de fleste av de tørre ingrediensene .
3

Tilsett agar og fortsette å riste eller røre. Alt av agar vil ikke oppløses , men det er viktig at du får mest mulig ut av det inn i løsningen . Unngå store klumper av uoppløst agar settling i bunnen av flasken .
4

Tett åpningen av flasken med folie .
5

Plasser kolben i en autoklav - trygg container .
6

Hell ca 1 cm vann i beholderen .
7

Sett beholderen og kolben inn i autoklaven . Sett autoklav for en flytende syklus og sterilisere i minst 20 minutter. Hvis du bruker en trykkoker for sterilisering , gå til trinn 8 . Hvis ikke, gå til trinn 10 .
8 p Hvis du bruker en trykkoker , plassere en liten mengde vann i komfyren og sett flasken i vannet . Ikke prøv å sterilisere mer enn 250 ml om gangen med denne metoden .
9

Bring trykkokeren til ca 20 psi og sterilisere i ca 30 minutter .
10

Fjern kolben fra autoklaven eller trykkoker , ta vare som kolben vil være ganske varmt .
11

Swirl kolben forsiktig når sterilisering er fullført . Dette vil fordele agar mer jevnt gjennom hele løsningen .
12

Sett flasken på et egnet underlag og la den avkjøles litt . Hvis du har forberedt en L eller mer av medium , gi den en svak virvel hver 10 til 20 minutter . Du vil være i stand til å fortelle at mediet er tilstrekkelig avkjølt når du kan holde baksiden av fingrene mot kolben i ca 2 sekunder uten at det blir ubehagelig varmt å ta på. Vent ca 15 til 20 minutter før du prøver dette .
13

Plasser en petriskål på et flatt underlag . Løft forsiktig lokket på skrå , slik at det meste av parabolen er igjen dekket . Ikke løft lokket rett av platen .
14

Hell mediet fra kolben inn i petriskål til parabolen er omtrent halvfull .
15

Umiddelbart erstatte lokket , og flytt platen til side og gå videre til den neste til alle ønskede plater har blitt fylt . Platene vil fullføre sin størkning i ca 30 minutter .
16

Plasser petriskåler i den sterile posen der de kom eller annet egnet , steril beholder hvis du ikke er inoculating dem med en gang . Forsegle beholderen for å bevare fuktigheten . Merke platene hvis ønskelig . Hvis du lagrer platene , bør de oppbevares ved en temperatur på ca 39 til 40 grader F.
arkiv