NBT -analyse Protocols

NBT eller nitro blå tetrazolium er en kjemisk forbindelse som brukes i biokjemi og immunologi for detektering av enzymet alkalisk fosfatase. Stoffet er også brukt i diagnostisering test for kronisk granulomatøs sykdom, som påvirker immunodefense celler. NBT- assay-fremgangsmåter omfatter immunoblotting , BCIP /NBT alkalisk fosfatase -substrat -løsning og påvisning av galaktosidase og alkalisk fosfatase aktivitet i vev. Immunoblotting

Immunoblotting er en teknikk som brukes for å påvise antistoffer , som er proteiner som er involvert i immunodefense prosessen , sier Susan R. Haynes i " RNA og protein Protocols ". Dette omfatter bruk av NBT , så vel som bovint serumalbumin , primære antistoff 9E10 , Comassie fargingsoppløsning , nitrocellulose- membraner , av Tris-base -buffer -løsning, ammonium per - sulfat , natrium- dodecyl -sulfat og vannmettet buthanol .

BCIP /NBT Alkaline Phosphatase Substrate Løsningsarkiv

Teknikere tilberede en løsning med tre dråper av en prosent 5-brom- 4-klor -3 -indolyl -fosfat ( BCIP ) , tre dråper 1,5 prosent NBT , to dråper av det kjemiske stoffet Levamisole og alkalisk fosfatase (AP) -buffer ved pH 9,5 , i henhold til IHC Verdens nettsiden. Løsningen er da inkuberes ved romtemperatur og tilgjengelig for bruk .
Påvisning av Galactosidase og alkalisk fosfatase Aktiviteter i Tissue

galaktosidaser er enzymer som kan bryte galaktosid -molekylet , er tilstede i bakteriene Escherichia coli og andre organismer. Ifølge protokollen Online , i løpet av denne protokollen , biologer bruker rottecelleprøverbehandlet med PBS løsning , glutaraldehyd og paraformaldyde . Deretter tilberede de brom- klor- indolyl - galaktopyranosid eller X -gal reaksjonsbuffer for prøvene , ved hjelp av kalium- ferrocyanid , magnesiumklorid, natrium- deoksycholat og vaskemiddel Nonidet P -40. Teknikere kan bruke nitroblåtttetrazolium ( NBT ) i stedet for kaliumferrocyanidi en raskere . Celleprøver er senere observert i henhold mikroskop .