Hvorfor legger du røntgenfilmen på toppen av nylonmembranen i brettet?

I sammenheng med molekylærbiologiske teknikker som Southern blotting eller Northern blotting, plasseres ikke røntgenfilmer vanligvis på toppen av nylonmembraner i skuffene. I stedet blir nylonmembraner som inneholder elektroforetisk separerte nukleinsyrer (DNA eller RNA) ofte overført til faste bærere, slik som Whatman-papirer, etterfulgt av baking eller UV-kryssbinding for å permanent immobilisere nukleinsyrene på membranene.

Røntgenfilmer plasseres ved siden av eller i nær kontakt med disse nylonmembranene, vanligvis pakket separat i plastfolie, når autoradiografi utføres. Autoradiografi tillater påvisning og visualisering av radioaktivt merkede nukleinsyrer på membranene ved å plassere røntgenfilmer ved siden av dem i kassetter (lukkede lysbestandige bærere som holder filmen tett inntil membranen).

Når det radioaktive materialet forfaller, frigjør det energi i form av fotoner eller elektroner, som samhandler med sølvhalogenidkrystallene på røntgenfilmen. Dette fører til utvikling av mørke flekker eller bånd på røntgenfilmen etter prosessering, tilsvarende posisjonene til de radiomerkede nukleinsyrene på membranen.

Derfor plasseres ikke røntgenfilmen direkte på toppen av nylonmembranen, men brukes separat for å fange ut strålingen som sendes ut av de radioaktive probene hybridisert til nukleinsyrene på membranen.