Hva er Gel Electrophoresis

? Gel elektroforese er en fremgangsmåte for å separere og identifisere og karakterisere blandinger av proteiner eller nukleinsyrer. Denaturert prøvene migrere etter påføring av elektrisk energi i et tynt , våt gel vanligvis laget av polyakrylamid -eller agarose . De separerte prøvene er farget slik at de kan sees. Gel elektroforese anvendes på protein -og nukleinsyre- undersøkelser og i sykehus for å identifisere spesielle proteiner eller DNA- mønstre for å diagnostisere sykdommer , genetiske mangler og genetiske forbindelser . Sample Preparation

Når et vaskemiddel , for eksempel natrium- dodecylsulfonate (SDS ) ble tilsatt til en protein -eller nuklein -syre , blir vaskemiddel omgås og brett ( denaturert ) proteiner og nukleinsyre. Denaturering av proteiner som gjør det lettere å bestemme deres molekylvekt i elektroforese. Den mengde prøve som kreves er vanligvis 100 til 500 nanogram per sample bånd for proteiner og 5 til 100 ng per band for nukleinsyrer i et totalt volum på omtrent 25 til 40 mikroliter .
Gels

En gel, vanligvis laget av polyakrylamid -eller agarose , kan fremstilles eller kjøpes for å skille disse proteinene . Gelen er mye som gelatin. Det er hovedsakelig vann , men er solid nok til å håndtere . Gelene inneholder buffer for å kontrollere pH. Gelen er meget tynn ( 1-2 mm) og rektangulære. Den ene siden ser ut som en kam med mye manglende tenner . Hullene kalles brønnene .
Sample Loading

One steder gelen i et kammer med buffer og denaturert proteiner er lagt til brønnene . Eksempler på kjente molekylvekter blir tilsatt til de ytre brønner. Gels er laget med forskjellige mengder av polyacrylamid . En lav gelstyrke (4 prosent ) er bedre for separering av molekyler med høy molekylvekt , mens en høyere gel- styrke ( 12 prosent ) brukes for høymolekylære molekyler. En gradient gel varierer i gelstyrke og som kan skille en rekke proteiner med tap av noen oppløsning.
Elektro

Med anvendelse av en høy elektrisk spenning , de denaturerte proteiner beveger seg mot bunnen av brønnen. Jo større vekten av protein, jo langsommere den beveger seg. Når strømmen er slått av , proteiner slutter å bevege seg . Man fjerner gel fra kammeret og det rocker i en tallerken med fargestoff . Organiske fargestoffer som Coomassie blue eller metallfargestoffer brukes til flekk proteiner , mens fluorescerende fargestoffer som for eksempel etidiumbromid brukes for nukleinsyrer.
Analyse av resultater

Med fjerning av overflødig beis , kan man se at blandinger separate inn band som ser ut som stiger . Posisjonen av båndene er i forhold til den lengde som standarder for å bestemme molekylvekten av prøven i hvert bånd. Gelen kan bli dehydrert med alkohol og tørket slik at den kan lagres. Fargeintensiteten av bandet deretter kan måles for å bestemme konsentrasjonen av proteinet i hvert bånd.
Protocol Development

standard protokoller er tilgjengelige for å arbeide med godt kjente proteiner . Hvis en forsker arbeider med en ukjent prøve, kan gelen styrke, buffer type, buffer pH , spenning , løpstid , og flekken alt trenger å være optimalisert for å oppnå best separasjon og signal.
protokoller