Slik tester Konsentrasjon av Amylase Enzymer

er Amylase enzymer som produseres i bukspyttkjertelen og i spytt kjertler og hjelpe fordøye og behandler karbohydrater . Når bukspyttkjertelen blir syk , er amylase slippes ut i blodstrømmen. Når en pasient opplever fordøyelseskanalen problemer eller det er sykdom i bukspyttkjertelen, vil en lege bestille en blodprøve for å fastslå nivået av amylase i blodet. Overvåkingen av amylase enzymnivåer vil gi mye informasjon om utviklingen av sykdommen , og virkningen av behandlingen. Du trenger
UV /VIS spektrofotometer arkiv 15 store reagensglass
Test tube stativ
1 mg /ml stivelsesløsning
De- ionisert vann
KI /jod reagens
Pipettes
Dropper
Tissue
Veigrøfter
Graph papir
Blodprøve
Sentrifuger
Stoppeklokke på
Vis flere instruksjoner arkiv Utarbeidelse av en Stivelse Standard Curve
en

Slå på spektrofotometer og sett den til en bølgelengde på 620 nm. La instrumentet for å varme opp i minst 10 minutter , slik at responsen vil være stabilt under forsøket .
To

Sett ut seks reagensrør , merke dem 1-6 og plassere dem i en test tube rack. Arrangere løsninger av stivelse, de- ionisert vann og KI /jodløsning på benkeplaten
3

Fyll røret 1 med 3 ml de- ionisert vann ved hjelp av en pipette.; Dette vil fungere som den blank . Fyll rørene 2-6 med 3.0 ml, 2.9 ml, 2.7 ml, 2.4 ml og 2,1 ml av deionisert vann hhv . Legg stivelsesløsning i hvert av rørene 2 til 6 i følgende rekkefølge : røret 2 får 0 ml , røret 3 blir 0,1 ml , røret 4 blir 0,3 ml , røret 5 blir 0,6 ml og røret 6 blir 0,9 ml
<. Br> 4

til en dråpe av KI /jodløsning til hver av de seks rør. Bland forsiktig hvert rør grundig før innspillingen av sitt absorbans i spektrofotometer .
5

Fyll kyvetten med blank løsning , rengjøre utsiden av kyvetten og plassere den i det tomme hullet på spektrofotometer . Juster absorbansen til null. Alle andre løsninger vil gi en positiv absorbans .
6

Fyll prøven kyvetten med hver av de andre fem løsninger i sving. Tørk av kyvetten før hver måling. Noter absorbans verdi for hvert rør . Skyll kyvetten med den nye løsningen minst en gang før du fyller for testen .
7

Lag en graf som plotter absorbansavlesninger mot stivelse konsentrasjon . Dette er standardkurven som gjør at du kan bestemme konsentrasjonen av en løsning som har en gitt absorbans lesing .
Bestemme amylasekonsentrasjonen
8

Rengjør alle prøverørene fra den første delen av testen. Ta vare på det tomme rør for bruk senere .
9

Skaff en blodprøve fra pasienten . Plasser prøven i en sentrifuge , og separere de røde blodcellene fra blodplasmaet .
10

fylle et reagensglass med 9 ml av de- ionisert vann og 1 ml blodplasma . Dette er en 1:10 fortynning av plasma. Bland røret grundig og pipette 1 ml av oppløsningen inn i et andre prøverør. Merke de to rørene med innholdet .
11

Forbered deg på å utføre en tidsbestemt test . Ha en stoppeklokke hendig og satt opp syv reagensglass med kyvetter i reagensrør rack. Du vil ta målinger hver to minutter når testen starter . Spill nøyaktig tid og absorbans lesning for hver av de syv datapunkter . Fyll hver av de syv reagensglass med 2 ml de- ionisert vann .
12

til 9 ml av stivelsesoppløsningen til testrøret som har en ml av 1:10 fortynning av plasma. Så snart du begynner å legge stivelsen , starter stoppeklokken . Bland testrøret godt og pipette 1 ml av stivelse /plasma -løsning inn i den første av syv reagensglass. Noter tid . Legg en dråpe KI /jod løsning på reagensglass og bland .
13

Overføring til kyvetten , tørke utsiden og registrere absorbans . Gjenta fremgangsmåten med de resterende seks reagensglass med to minutters mellomrom . Ved avslutningen av tidsbestemt testen bør du ha avlesninger for den faktiske tiden og absorbans for tidsspenn på 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 og 12 minutter .
14

Bruk standard kurve for å finne konsentrasjonen av stivelse for hver av de syv datapunkter. Disse punktene vil være avtagende med tiden . Den amylase fordøyer stivelse og over tid forbruker all stivelsen er tilgjengelig.
15

graf av datapunkter for den tidsbestemte test som stivelseskonsentrasjonversus tid . Skråningen av denne kurven indikerer mengden av amylase i plasmaprøve .