T- Cell Culture Protocols

T- celler, som hører til en familie av immunceller som kalles lymfocytter, blir generert i løpet av en adaptiv immunrespons. T- cellene stammer fra benmarg stamceller og modnes i thymus . Det finnes flere forskjellige typer av T- celler, hver med en forskjellig funksjon. T- celler er atskilt fra hverandre ved hjelp av den vedlagte T -celle- antigen -reseptor. Et undersett av T-celler bærer CD4- markøren og bidrar til å indusere en immunrespons . Kilder til T- celler

T- celler kan hentes fra ulike kilder , inkludert milten , lymfeknuter , og thymus , men perifert blod er den mest tilgjengelige kilden til T- celler for kultur formål . Blodprøver blir grundig undersøkt for infeksjoner og andre forurensninger og forsiktig håndtert under et sikkerhets- skap. T- celler dyrkes av flere grunner , blant annet toksisitet målinger og å studere immunologiske vaksine svar.
Isolation

T- celler er ofte adskilt fra fullblodprøverav tetthet - gradient separasjon, som T- celler er mindre tett enn røde blodceller slik som erytrocytter , og derfor ble ekstrahert ved sentrifugering. Et egnet nøytral salt-løsning tilsettes til blodprøven , etterfulgt av en Ficoll isopaque løsning. Ficoll isopaque har en tetthet som er større enn T-celler , men mindre enn erytrocytter , og under sentrifugering danner et midtre lag mellom de to cellene , slik at T- cellene til å bli fjernet fra toppen. De T- celler er ytterligere sentrifugert , supernatanten fjernes, og en liten aliquot telles for å bestemme cellenes levedyktighet . Cellene er enten brukes direkte for eksperimenter eller fryses ned for senere bruk .
Kryopreservering

Kryopreservering reagenser er forberedt på forhånd for å unngå T - celle nedbrytning på rommet temperatur. Hvis ikke er mulig , blir cellene holdes på is eller i kjøleskap . Reagensene består av cellekulturmedier, og 10 til 13 prosent humant serum albumin ( HSA) protein, så vel som cellekulturmedier og 10 prosent dimetylsulfoksid (DMSO) . DMSO minimerer dehydrering, pH-endringer , og elektrolytt konsentrasjonsendringeri forbindelse med frysing . T- celler blir resuspendert i reagens -inneholdende cellekulturmedierog HSA i en cryotube . Det reagens -holdige DMSO blir langsomt tilsatt til cellene og forsiktig virvlet . Cellene blir deretter overført til en fryse kar som inneholdt isopropanol for å sikre en gradvis temperatursenkning og lagret.
Tining

når t -celler tines , en cryotube fjernes fra lagring og inkubert ved 37 grader Celsius. Derpå blir den aktuelle tinemediumlangsomt tilsatt til cellene til det dobbelte volum er nådd, overføres til et eget rør, og sentrifugert . Benzonase er noen ganger tilsatt til tinemedium for å forhindre klumpdannelse av døde T-celler. Det sentrifugerte pellet blir reagert i celle- kulturmedier , og cellelevedyktighetenblir vurdert . T-cellene er da klar til bruk for respektive eksperimenter .