Hvordan måle Cell Livskraftig

I de fleste biologiske eksperimenter på cellekultur , et kritisk punkt inkluderer å vite hvilke celler som er i live , og som er døde i prøven din . Dye uttrekk er den mest populære metode for måling av cellenes levedyktighet . Dye uttrekk er basert på teorien at levende celler inneholder intakte membraner og døde celler ikke , således døde celler absorbere fargestoffet inn i cytoplasma . Det finnes ulike fargestoffer og protokoller og metodene du velger bør være basert på kostnader , følsomhet , enkel og lengden på prosedyren . Trypan blått er et vanlig fargestoff som brukes til å måle cellenes levedyktighet , fordi fremgangsmåten kan utføres i fem til ti minutter og koster bare mengden av fargestoff -reagens . Du trenger
0,4 % trypanblått reagens
hemacytometer
Cover slip
Mikropipette
Pipettespisser
Phosphate buffered saline ( PBS )
lysmikroskop

Vis mer Instruksjoner
en

Skaff en pellet av cellene du måler .
to

resuspender cellen pellet i PBS for å få ca 5 x 105 celler /ml . PBS blir brukt fordi levedyktighet målinger er mer nøyaktige når cellene er i et serumfritt miljø; serumproteiner kan også beis og gi deg misvisende resultater .
3

Legg like deler av cellesuspensjon i PBS til like deler av 0,4 % trypan blått fargestoff for å få en 1 til 2 fortynning (eksempel : . 100 ul av celler til 100 ul av trypan blått ) og bland ved å pipettere opp og ned
4

Inkuber blandingen til mindre enn tre minutter ved romtemperatur . Dersom cellene blir tellet etter omtrent fem minutter, vil levedyktighet være unøyaktig på grunn av celledød.
5

Med dekkglass som allerede er på plass, fylles på hver side av et hemacytometer teller med cellesuspensjonen . Vanligvis vil hver side ta 10 til 20 ul .
6

Plasser hemacytometer på scenen av et lysmikroskop og fokus på cellene .
7

Hver side av den hemacytometer inneholder flere firkanter . Telle det totale antall celler i en firkant av hemacytometer . Deretter telle antall ikke- levedyktig ( blå ) og levedyktige (klar ) celler hver for seg, på samme plassen .
8

Beregn prosentandelen av levedyktige celler på torget ved å dele antall levedyktige celler av det totale antallet celler og multiplisere med 100 . Gjør dette for flere ruter på hemacytometer å få et gjennomsnitt levedyktighet måling .