Den TMRE Protocol

tetramethylrhodamine etyl ( TMRE ) er en "slow , lipofile , kationiske fluorescerende reditribution fargestoff " brukt i MitoPT ™ TMRE /TMRM mitokondriemembranen Potential Assessment Kit , produsert av Immunochemistry Technologies , LLC . Prosessen bidrar til å vise en transmembrane elektrisk potensial gradient i cellene . Klar analysen

Protokollen er enkel å følge, og tar ca 20 minutter å behandle ved 37 grader Celsius . De levende celler som benyttes i analysen, kan ta mellom flere timer og flere dager for å klargjøre for bruk . Kontroll cellene kan ta flere timer å forberede , så de trenger å bli overtalt til å gjennomgå apoptose .
Protocol Part 1

Kultur celler til en tetthet optimal for apoptose eller oksidativt stress induksjon , i henhold til dine spesifikke induksjon protokollen , men ikke å overstige 10 ( 6 ) celler /ml .
Protocol Part 2

Samtidig tid , kultur et ikke - indusert negativ kontroll cellepopulasjon ( på samme tetthet som den induserte befolkningen .
Protocol Part 3

indusere apoptose eller med hensikt depolarize mitokondriene følgende ønsket protokoll .
Protocol Part 4

Forbered 1X analysen /vaskebuffer .
Protocol Deler 5 til 8

Klargjør en mm eller 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lager . for protokoll Del 6 , forberede en 1:100 fortynning av 1 mm, eller en 1:20 fortynning av 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM løsning for spiking i cellekulturprøver.

for protokoll del 7 , beis celler ved hjelp av en endelig 20-200 nM konsentrasjon av MitoPT ™ TMRE /TMRM løsning .

for protokoll del 8 , analysere data .
arkiv