Helse og Sykdom
Noen celler holder seg til bunnen av petriskåler eller forbli suspendert i væsken . Cellene kan være av plante-eller animalsk opprinnelse. Celler som brukes i vevkulturer kan være primære celler , noe som betyr at de ble høstet direkte fra en organisme , eller i en cellelinjesom er blitt opprettholdt i kultur. Cellelinjer er ofte kreftceller , og dette må tas i betraktning når du planlegger eller tolke eksperimenter .
Unn Cells forsiktig
Adhererende cellene er fjernet fra sin petriskål for passering av skraping eller med en protease , vanligvis trypsin og EDTA. Skraping dreper mange celler , og bør bare brukes når du forbereder cellelysater ( flytende preparater av celleinnholdet for analyse ) eller når trypsin /EDTA absolutt må unngås .
Trypsinizing fjerner ikke bare de proteinene som holder cellene til parabolen men de fleste andre proteiner på membranen i cellen , også . Celler ballen opp og ta litt tid , vanligvis over natten , for å reetablere en obligasjon med parabolen . Legge til en minimal mengde av trypsin - rundt 1 ml for en 25cm2 kolbe - gynge kolben i fem sekunder eller mindre å belegge monolaget , og deretter helle av eller aspirering av den overskytende trypsin vil redusere mengden av trypsin som monolaget blir utsatt for. La cellene hvile i inkubatoren i løpet trypsinering .
Etter cellene gli av bunnen av fatet , legge til media med serum og aspirer lysatet opp og ned pipetten forsiktig . Tillat litt media å forbli i fatet som du pipettér opp og ned flere ganger for å bryte fra hverandre klumper og få en enda suspensjon .
Ikke suge bobler inn i pipetten . Også, ikke kraftig blande eller vortex cellesuspensjonen ; cellene er veldig skjøre i denne balled kopiert tilstand .
Til Heat inaktivere eller ikke å varme inaktivere
Når cellekulturteknikkervar i sin spede begynnelse , føtalt bovint serum ( FBS ) var kjent for å inneholde komplement- proteiner, som er immunsystemet proteiner som lyse celler . Komplement- proteiner er ikke ønskelig i cellekultur. Varme inaktivere FBS på 56 grader Celsius i 30 minutter vil gjengi komplement proteiner inaktive . Prewarming FBS til 37 grader C også er nok til å inaktivere komplement proteiner .
I de tidlige dager , varmeinaktiveFBS også drept mykoplasma og andre forurensninger . På den tiden ble filtersteriliseringutført med 0,45 um filter. I dag , vi filtrere sterilisere FBS og media gjennom 0.1um eller 0.04um filtre. Ingen mycoplasma vil slippe gjennom at
p Dette etterlater oss spørsmålet om ikke å varme inaktivere
Heat inaktive forringer alle komponenter i FBS - . . Som vitaminer , aminosyrer og vekstfaktorer - . muligens under terskelen for noen pirkete cellelinjer
p Hvis du arbeider med en saktevoksende eller pirkete cellelinje , bør du vurdere å bare filtrere sterilisering dine FBS . Du kan finne dette øker robustheten av cellene .