Cell- ELISA -basert protokoll

ELISA , eller enzym -linked immunosorbent assay , blir brukt som et diagnostisk verktøy i medisin og i biologisk forskning for å kvantifisere mengden av et bestemt protein. ELISA anvender antistoffer for å påvise proteinet av interesse , og et reagens som gir en farge. Mengden av farge relateres til mengden av protein. Cell Kultur

Cells skal plasseres inn i brønnene til en 96 - brønns plate med 100 mikro liter vekstmedier og cellene igjen å bosette over natten . Hvis du studerer cellenes reaksjon på en faktor , bør cellene være serum -sultet i 24 timer og deretter stimulert med faktor under studien .
Fiksering og Primary Antibody

Etter fjerning av mediet , blir cellene behandlet med et fiksativ som 3 pst. formaldehyd , eller metanol . Den cellemembran må permeabilized for å tillate antistoffet å trenge inn i cellen. Permeabilization kan oppnås ved bruk av 0.1 prosent Triton, dersom metanol ikke tidligere har vært brukt . Ikke-spesifikk binding kan forebygges ved bruk av 10 prosent kalvefosterserum fortynnet i fosfat -bufret saltvann . Etter fjerning av blokken , kan det primære antistoff brukes og inkuberes i en time .
Sekundært antistoff og Stain

Fjern den primære antistoff , og vask tre ganger . Til en sekundær antistoff koblet til en deteksjonsmiddel , slik som pepperrot- peroksydase . Inkuber i en time. Wash Legg chemiluminescent substrat løsning . Utvikle og skanne plate for fargeintensitet .