Alkalisk Lysis Theory

Forskere bruker alkalisk lysis å ekstrahere plasmid -DNA fra bakterier for anvendelse i genetiske eksperimenter . Plasmider er små sirkulære molekyler av DNA inneholdende en liten del av genetiske koden for studien. Hvorfor alkalisk Lysis

Den alkaliske lysis -protokollen består av en serie av løsninger som er tilsatt en bakteriell pellet inneholdende plasmid -DNA . Den økte alkaliteten i løsningen forårsaker at cellene briste . Denne metoden for utvinning beskytter plasmid DNA mens ødelegge den genomisk DNA og denaturering cellulære proteiner til å gi vitenskapsmann med en relativt ren prøve .
SDS og NaOH

Alkaline beskriver to viktige kjemikalier som brukes til å forårsake lysis av individuelle celler . Natrium- dodecyl ( lauryl ) -sulfat (SDS ) er et vaskemiddel som destabilisert cellen ved å lage hull i cellemembranen . Natriumhydroksid ( NaOH ) legger i å bryte ned celleveggen forårsaker celle å gå i oppløsning og slipper sitt genetiske materiale inn i løsningen .
Hvorfor Plasmid DNA overlever

En ytterligere egenskap ved NaOH i den alkaliske lyseringsprotokollen er å forstyrre den hydrogenbinding mellom DNA basepar . Dette denatures genomisk DNA og plasmid DNA til ett og ett hårstrå . Tilsetning av kaliumacetat til oppløsningen nøytraliserer alkalitet og den lille plasmid -DNA er i stand til å re- natur og oppløses i oppløsningen. Genomisk DNA er for stor til å re- natur hele lengden. Det og de ​​denaturert proteiner fremskynde ut under sentrifugering forlater plasmid DNA i løsningen .