Hvordan analysere flowcytometri data

Flowcytometri er prosessen med å analysere og telle celler og partikler ved hjelp av teorien om lysspredning og lys eksitasjon . Cellene blir tvunget gjennom en kappe en av gangen , og passere gjennom strålen fra en laser. Laseren eksiterer kjemikalier i cellene. Forskjellige typer celler avgir forskjellige typer av lys. Optiske detektorer eller linser plukke opp og måle lyset , å overføre lys inn i en datastrøm . Ved å analysere data , kan teknikere finne fordelingen av celler og hjelpe legen og forskere ta beslutninger om behandling . Instruksjoner
en

sette opp parametre for cytometeret . Hver cytometer har en datakomponentsom aksepterer lys emittert fra cellene og konverterer mengden og kvaliteten av lys til tilgjengelige data . Siden det finnes forskjellige typer av celler , er det en stor mengde av data som er opprettet . Parametrisering av de dataene som trengs bremser ned flyten av informasjon til et håndterlig nivå . Noen alternativer er angivelse av spenningsnivå , justere laser puls parametere eller sette lyset terskelen .
To

Velg filtrene på hver optisk linse . Filtre som kuttet ut spesifikk båndbredde for hver linse tillate cytometeret å gjenkjenne de forskjellige kjemiske egenskapene til hver celle . Den tillater også cytometeret å gjenkjenne om lyset reflekteres rett fram , som en fremskutt scatter ( FS ) eller hvis det er reflektert i en 90- graders vinkel i en side scatter ( SS. )
3

Velg logaritmisk eller lineær oppkjøpet. Lineær oppkjøpet er rådata som er generert av cytometeret . Den viser den type cellen, eller den kjemiske sammensetningen av cellene som strømmer gjennom laserstrålen. Logaritmisk funksjon går ett skritt videre . Den bruker en matematisk funksjon for å projisere flere celler som kanskje ikke er synlig av cytometeret . For eksempel kan celler viser en kjemisk forbindelse som er et biprodukt av en viral infeksjon. Selv om viruset kan være for liten til å bli detektert av lyset slippe , vil den logaritmiske funksjon hypotese tilstedeværelse av viruset basert på den kjemiske sammensetningen av cellene.
4

Velg ett eller to parameter histogrammer . Dette er typer grafer som brukes til å vise de dataene som samles inn av cytometeret . En en parameter histogram er hensiktsmessig dersom dataene er tatt plottet på en "positiv "-aksen , noe som betyr at alt lys som reflekteres og måles. En enkel måte å tenke på dette er å forestille seg et søylediagram , med nivåer på venstre og nederst på rammen . Informasjonen er plottet mellom disse to parametere. Men for de celler som absorberer forskjellig mengder av lys , er en to- parameter histogram som brukes . Dette gjør at data som skal plottes på både en positiv og negativ akse .