Plaque Assay Method

An -analysen er en teknikk som brukes for å isolere og rense virus og til å bestemme virale titere ( den laveste konsentrasjon av viruset som fører til infeksjon ) . En plakett analysen , opprinnelig kalt en virologisk analysen , ble utviklet for å måle og telle smittsomhet av bakteriofager . Ifølge biologi - Online.org , ble det senere også brukt til å telle pattedyr virus . Fakta

En plakett er en konfluent , monolayer kultur av celler . Den danner som et resultat av infeksjon med en av cellene med en enkelt viruspartikkel , ifølge Biology - Online.org . Når cellen er infisert, replikerer og dreper viruset i cellen etterhvert . Videre nylig kopiert viruspartikler spredt , infisere og drepe de nærliggende celler .
Funksjon

I en plakett analysen , er kulturen først farget med en bestemt farge . Dette die flekker bare levedyktige (levende ) celler , ifølge biologi - Online.org . Som et resultat av de døde cellene synes unstained i kultur, mot den fargede bakgrunn. Foreløpig er plakk analysen søkt å påvise celler som produserer antistoffer som ødelegger erytrocytter ved hemolyse .

Funksjoner

Erytrocytter er celler (også kalt røde blodceller ) som inneholder hemoglobin og transportere oksygen og karbondioksyd i blod, fra lungene og vev. Hemolyse oppstår når erytrocytter bryte åpne og slipp hemoglobin , ifølge biologi - Online.org . Som et resultat, i plaque -analysen , er grunnlaget klare plakk , og angir at de røde blodceller er blitt Hemolyserte av antistoffene .
Metode Del I

Ten - fold fortynninger av et virus lager er forberedt før du utfører en plakett analysen og 0,1 ml aliquiots er satt på til cellemonolagene. Denne blandingen blir inkubert i en tidsperiode slik at viruset har tid til å angripe cellene. Videre er monolagene som omfattes av et næringsmedium som inneholder en substans (vanligvis agar ), ifølge " gjenkjenner virus : A Plaque Assay " av Vincent Racaniello . Den næringsmedium danner en gel , og etter at kulturen inkuberes , de opprinnelige infiserte celler frigi virale avkom. Gelen begrense spredningen av viruset til omliggende celler , og som et resultat , gir den infeksiøs partikkel en sirkulær sone som kalles en plaque . Med tiden vokser plakett til en størrelse synlig med det blotte øye og fargestoffer brukes til å forsterke seer .
Metode Part II

virustiter beregnes i plakk forming enheter, kalt PFU , per milliliter . De blir talt , og , for å reduseres til et minimum feil, bare plater som inneholder mellom 10 og 100 plaques blir talt. Videre, i henhold til " gjenkjenner virus : En plakett analyse " for hver 100 telte plaketter samme titer vil variere med pluss eller minus 10 prosent . Derfor estimert feil av en plakett analysen er om lag 10 prosent , når utført riktig .