Gram flekken begynner med et lysbilde smøre. Med en innsprøytning sløyfe eller trepinne , forskere samle et lite utvalg av de bakterier ( vanligvis dyrket i en petriskål ) og smøre det på et lysbilde . Deretter vil de tillate prøven til tørk, noen ganger ved hjelp av en lav flamme for å fremskynde prosessen .
Bruke en Stain
Når prøven er tørr, bruker forskerne en flekk med krystallfiolett , en mørk lilla kjemikalie . Etter et minutt eller så , forskere skylle vekk overflødig krystallfiolett med vann eller alkohol . Så kommer en jod smøre , som fungerer som en mordant . Det vil si, jod hjelper krystallfiolett "stick " til bakteriene. Forskere refererer ofte til dette trinnet som "fikse fargestoff . "
Bruke en Counterstain
Når krystallfiolett er fast , forskere bruke en annen skylling og deretter en counterstain med safranin , en rosa kjemisk . Bilbuous papir kan hjelpe tørke raset , som nå er klar for nær visning .
Vise Stain
Under et mikroskop , Gram-positive bakterier vises brun eller mørk lilla , fargen til krystallfiolett . Dette skyldes Gram-positive bakterier som inneholder store mengder av peptidoglykan , et nett -aktig substans, i deres cellevegger . Peptidoglykan gir celleveggerstyrke og form, og det som skiller dem fra gramnegative bakterier , som vil vises , rosa fargen safranin . ( Uten safranin counterstain , ville de være gjennomsiktig og vanskelig å se i det hele tatt . )
Mange Gram-negative bakterier ikke inneholder noen peptidoglycan , men ikke på langt nær så mye som Gram-positive bakterier . Plasseringen av peptidoglykan er også forskjellig : i Gram-positive bakterier , peptidoglycan utgjør en del av celleveggenesytre lag. Det ytre laget av gramnegative bakterier , på den annen side motstår krystallfiolett . Av den grunn er det de Gram-positive bakterier som vises lilla .
Etter Gram Stain
Etter en Gram flekken , kan forskerne identifisere Gram-positive bakterier mer presist gjennom ytterligere testing . De kan undersøke, for eksempel, en ukjent bakteriens morfologi, struktur, bevegelse og genetikk. Før forskning har delt Gram-positive bakterier inn i fire familier --- den Bacillaceae , Micrococcaceae , ien Myco og Peptococcaceae --- og hver av disse familiene har avslørende kjennetegn :
Bacillaceae er stavformede bakterier . Hvis de kan bevege seg av seg selv , de har flageller som dekker hele overflaten .
Micrococcaceae er sirkel - formet . De kan ikke bevege seg av seg selv , og når de deler , danner de grupper av fours, eller tetrads .
Ien Myco er formet som forsiktig- buede stenger . Når de dele , kan de enten danne filialer eller lange, på kryss og tvers figurer .
Peptococcaceae er også sirkel - formet . På grunn av sin struktur , krever de miljøer uten oksygen , og noen ikke kan vokse der det er salt .
Betydelig variasjon eksisterer innenfor hver familie .