HPLC teknikk

HPLC står for høy ytelse væskekromatografi , en standard kvalitativ og kvantitativ analyse prosedyre brukt i analytiske laboratorier . HPLC er pålitelige og repeterbare, som gjør den foretrukne teknikk for å separere , identifisering og kvantifisering av molekyler fra komplekse blandinger av både kjemiske og biologiske komponenter . Fire Komponenter

HPLC teknikk inneholder fire hovedkomponenter . For det første er det løsningsmiddel leveringssystem ( mobil fase ) , som bærer prøvene gjennom kolonnen , viktig, fordi polariteten påvirker systemets evne til å skille molekyler. Den kromatografikolonne er vanligvis en vertikal glass -kolonne som er fylt med en adsorbent . For det andre er den adsorbent ( også kjent som den stasjonære fase , fordi den ikke beveger seg ) vanligvis silika eller alumina . For det tredje består prøven innføring system for en form for injeksjonsport for å introdusere prøven som skal analyseres inn i det løsningsmiddel avgivelsessystemet . Den fjerde komponenten er detektoren .
Detektorer

type detektor som brukes avhenger av type prøve teknikerne bruker og hva molekyler de prøver å isolere . Kriteriene teknikeren bruker når du velger en detektor inkluderer selektivitet , signal - til - støy-forhold , deteksjonsgrense , lineære område , tidskonstant , drift og cellevolum . Vanlig brukte detektorer har ultrafiolette - synlig detektorer , massespektrometre , brytningsindekser , fluorescens detektorer eller fordamping lysspredning enheter .
Prosedyre

Slå på detektoren , pumpene ( som brukes for å legge trykk for å bevege den mobile fase gjennom den stasjonære fase ) , og datamaskinen som skal ta opp og skrive kromatogrammet . Velg de aktuelle programmer for å samle de ønskede data . Injiser prøve inn i injeksjonsåpningen . Hold et øye med trykket . Hver type kolonne har et maksimalt trykk ; ikke overstiger dette eller separasjon vil ikke forekomme. Print ut kromatogrammet og analysere resultatene . På slutten av hvert løp, er det viktig å skylle ut injeksjons port for å hindre oppbygging , noe som kan skape blokkeringer .
Typer

Hydrofilt samspill kromatografi bruker en limt polar stasjonær fase og et ikke-polart , vann - blandbart mobil fase for å skille molekyler basert på polariteten . Denne teknikken har evnen til å separere sure, basiske og nøytrale prøver i en enkelt chromatogram.Normal fasekromatografi benytter en polar stasjonær fase og et ikke-polart , ikke-vandig mobil fase for å skille strukturelle isomerer (molekyler med den samme molekylformel som har atomer bundet sammen i forskjellige måter ) . reversert fase- kromatografi er den mest benyttede form for HPLC. Den bruker en ikke-polar stasjonær fase og en vandig noe polart mobil fase . Denne metode er vanlig brukt av farmasøytiske selskaper å kvalifisere stoffer før release.Size utelukkelse kromatografi separerer molekyler basert på deres størrelse , og kan også bestemme strukturen til proteins.Ion byttekromatografi er basert på tiltrekningen mellom ioner i oppløst stoff og de ​​ladede områder bundet på den stasjonære fasen .
Bruker

HPLC er nyttig i en rekke applikasjoner . Den kan brukes til å analysere farmasøytiske materialer , noe som er nyttig i å undersøke nye legemidler samt rensing av de eksisterende. Det er også brukt til å analysere biologiske fluider , plantevernmidler , sprengstoffer og andre materialer. Selv om det er en populær teknikk for biomedisinsk , biokjemisk og farmasøytisk forskning , er det også brukt i kosmetikk , mat, miljø- og energibransjen .