PBMC Protocol

kryopreserveres perifere mononukleære blodceller( PBMC ) er en hyppig kilde til prøver for forskning som inkluderer immunotherapies og reaksjoner på vaksiner . Mens noen protokoller er begrenset til isolering og fryse faser av prosessen , mens andre omfatter tining prosedyrer. Isolation Fremgangsmåte og underkjølt Fremgangsmåte

En kommersiell forbindelse for å fremme separasjon er plassert i hver 50 ml sentrifugerør og rørene sentrifugert i tretti sekunder. Caps av reagensrør er sprayet med alkohol før åpning , så antikoagulant - behandlet helt blod blir så overført via pipette inn i sentrifugerør . Plasma sjikt av blodet blir sugd opp med en pipette.
Frysing

Cellene fra det foregående trinnet blir deretter sentrifugert med saltvann tre ganger. Etter et celletall , blir prøvene sentrifugeres deretter suspendert i iskaldt medium. Prøvene i frysemedium er neste delt mellom cryovials i en ml mengder . Ampuller lagres over natten i en

-70 º C fryser og flyttet til langtidslagring i flytende nitrogen neste dag .
Sikker Tining

cryovials overføres fra flytende nitrogen til en 37 ° C vannbad , og prøven tillates å tine ett til to minutter . En varm transportmedier er lagt til hvert hetteglass . Fortynnet cellesuspensjon sentrifugeres i syv minutter. Antallet og celleviabilitet er sjekket , Hvis cellene trenger å konsentrere seg, er prøvene sentrifugeres syv minutter . Prøven fortynnes til arbeidsløsning og hvilte 12-18 timer før du begynner eksamen i den angitte protokollen .