Western avsetninger Protokoller

A vestlige blotter er en type protein blot som brukes i det medisinske feltet, biologi laboratorier og andre vitenskapelige disipliner på en daglig basis . Vestlige blotter , når utført riktig, er en måte å studere protein uttrykk i vevsprøver . Fordi det kan være forskjeller i parametre for hver prøve , er det en rekke av protokoller som bør følges for å oppnå nøyaktige resultater. Utføre Vasker

Etter inkubasjon membraner i antistoff løsninger for riktig mengde tid , som varierer avhengig av hvilken antistoff løsning blir brukt , Encor Bioteknologi sier at membranen skal gjennomgå tre romtemperaturvaskingene i TBS . TBS er en løsning som har en spesifikk makeup og pH for vask. Membranen skal vaskes mellom hver innføring av et nytt antistoff løsning .
Forbereder Farging Blanding

Ifølge WesternBlotting.org , forbereder farging blanding umiddelbart før påføring det til medlemmet vil oppnå de beste resultatene . Det finnes flere typer av farveløsninger, hvorav noen kan kjøpes , og noen av dem må være blandet i laboratoriet. Chemiluminescence farging , ifølge Encor bioteknologi , gir mest mulig informasjon per flekken , men er også den dyreste og krever et mørkerom for å utvikle . Pepperrot peroksidase Farging og alkalisk fosfatase Blotting er andre alternativer for farging. Uansett hvilken metode som brukes , forbereder blandingen like før bruk er viktig .
Ved hjelp av en buffer

Etter at den valgte flekker løsning, bruk av en buffer er nøkkelen . I kjemiluminescens farging , påføring av et acetat over toppen av det farvende løsning er protokoll , i henhold til WesternBlotting.org . Pepperrot- peroksidase Farging krever bruk av en ammoniumacetat -buffer for å oppnå den brune flekker produktet. Bufferen brukes i alkalisk fosfatase Blotting , som skal lage en lilla flekker produkt , er mer komplisert å lage og kan kjøpes allerede gjort .