Adherente celler Protocol

Celler i kultur er enten en form dyrkes i suspensjon , slik som blodceller, eller celler som fibroblaster som krever en overflate som de kan feste seg . Noen av de overflater kan kreve belegg på forskjellige ekstracellulære matriser , avhengig av celletype og studier. Alle cellekulturer krever å bli utført er aseptiske betingelser . Optimal Environment

De fleste celletyper kan dyrkes i Dulbeccos modifiserte Eagles medium , ( DMEM ) eller i Roswell Park Memorial Institute ( RPMI ) med tilsetning av 10 prosent kalvefosterserum , 2 milimoles i aminosyre glutamin og antibiotika , for eksempel, 100 enheter penicillin og 0,1 milligram per milliliter streptomycin . Celler blir opprettholdt i sine medier i en fuktet inkubator ved 37 grader Celsius og 5 prosent karbondioksid .
Splitting

Cells bør sjekkes daglig for infeksjon , død eller vekst . Når vevdyrkningskolbe er 80 prosent belagt i celler , bør cellene deles opp for å opprettholde cellenes helse- og logg- vekstfase . Mediet ble fjernet og cellene ble vasket i fosfatbufret saltvann . Adherente celler krever tilsetning av trypsin og etylendiamintetraeddiksyre ( EDTA ) for å fjerne celle adhesjonsproteiner . Svak omrøring bør fjerne cellene. Trenger media for å bli tilsatt for å nøytralisere den trypsin /EDTA -løsning .

Ompodning arkiv

Utvannet celler og tryspin /EDTA -løsning kan sentrifugeres til pellets og vask cellene . Cellene kan bli re - suspendert i media og utvannet og replated inn nye kolber . Hver gang cellene deles cellene passasje nummeret økes med én .
Media Endre

Media bør skiftes to ganger i uken ved å fjerne de gamle mediene og erstatte med nytt , varmet media .