MBP Rensing Protokoller

MBP eller maltose bindende protein er funnet i bakterier Escherichia coli , som er en del av tarmfloraen hos mennesker og dyr. Denne rensing av MBP innebærer en rekke prosedyrer som tar sikte på å separere proteinet bestanddeler. I molekylærbiologi , er MBP rensing en viktig prosess for studiet av struktur og funksjon av dette proteinet . MBP rensing protokoller inkluderer MBP smeltet proteiner rensing , småskala MBP - fusion og maltose bindende protein fusion tag rensing. MBP Fused Protein Purification

Under denne protokollen, teknikere vask 20 ml av polymeren amylose harpiks med Atris -løsning ved pH 7,4 , natrium- klorid, merkaptoetanol (ME) og etylendiamintetraeddiksyre ( EDTA) , i henhold til protokoller online . Celleprøver er lagt , sentrifugeres og analyseres på gel elektroforese . Prøver er også analysert i en chromatographer , der teknikere eluatet eller observere løsningens bestanddeler når den går gjennom kromatografikolonne .
Småskala MBP - fusion protein rensing

Ifølge det hebraiske universitetet i Jerusalem , biologer bruker reagens isopropyl bD- 1 - thiogalactopyranoside ( IPTG ) , spin cellekultur for 10 min ved 8000 omdreininger i minuttet på 39,2 grader Fahrenheit . Senere , fjerner de overliggende væske og blandes kald PBS-buffer til prøven , som er delt opp i flere rør og sentrifugert på nytt. Prøvene blir deretter holdt ved -112 grader Fahrenheit for posterior analyse .
Maltose Binding Protein Fusion Tag Rensing

Affinity koder er genmodifisert molekyler ansatt i molekylærbiologi å oppdage og rense proteiner . Denne protokollen er et komplekst sett av prosedyrer delt inn i tre stadier , som inkluderer bygging av polyhistidine protein markør ( HisMBP ); et pilotforsøk for å vurdere løseligheten av proteinet; og storskala -rensing av MBP -molekyler , i henhold til naturen Protocols . Bortsett fra E.coli prøver, teknikere bruke ampicillin , kanamycin , IPTG , anhydrotetracycline , glukose monohydrat , cellelyse buffer , DNA polymerase , PCR primere , Tris - acetat - EDTA og etidiumbromid .