Cell Frysing Protocol

Sikrer celler gjennom frysing er viktig for forskning , veterinærmedisin og husdyravl fordi det gjør at cellene skal lagres over lengre tid . Den frysemetodevelges , må imidlertid redusere eller forhindre skade på cellen. Den frysemiddelog fremgangsmåten kan avhenge av celletype. Forberedelse

Cells bør fryses når de er friske og aktivt voksende med en 90 prosent levedyktighet . Forsiktighet bør utvises på håndtering og høyhastighets sentrifugering og sprek pipettering eller utsuging bør unngås for å opprettholde levedyktigheten og hindre celleskader .
Kryobeskyttelse

En kryobeskyttelse agent er brukes som en erstatning for intracellulær vann . Midlet forhindrer iskrystaller og dehydrering som forekommer i cellene. Sterilisert glycerol og sterilisert dimetylsulfoksyd blir ofte brukt ved en konsentrasjon på 5 prosent til 15 prosent (volum per volum) fortynnet i enten føtalt kalveserum eller vekstmedier, avhengig av celletype .
Frysing og lagring

Celler i det iskalde blandingen bør kjøles sakte . Hvis en programmerbar fryser ikke er tilgjengelig , kan cryovials pakkes inn i vev eller plassert i styrofoam , noe som kan forsinke fryseprosessen . Cellene skal holdes på minus 80 grader Celsius i 24 timer og deretter overført til flytende nitrogen for langtidslagring .
Tine arkiv

Frosne celler skal ikke tines raskt . Et vannbad på 37 grader Celsius kan brukes. Forsiktighet bør tas med celler som er lagret i flytende nitrogen , men som flytende nitrogen kan gå inn i hetteglass og kan eksplodere på tining . Den fryse blandingen skal fortynnes i vekstmediet . Cell levedyktighet bør vurderes med fargestoff trypanblått og cellene dyrket som normalt.