Retrovirus infeksjon Protokoller

inneholder en RNA genomet som er innkapslet i en kapsid og lipid konvolutt , retrovirus inneholde polypeptidkjeder som hjelper koble dem til reseptorer i membraner av vertsceller de infiserer . Mens de fleste cellene arvelig informasjon er kodet i DNA, er det av retrovirus inneholdt i RNA ; retrovirus også bære enzymet revers transkriptase , slik at de kan forholde seg til verts DNA . Visse protokoller er fulgt av laboratorier i målrettet infeksjon av cellen med disse DNA- virus. Klar Laboratory

Visse laboratorieutstyr og rekvisita som er nødvendig for å hjelpe til i prosessen med retroviral infeksjon . Utstyret omfatter en pipette hjelpemiddel , en pipette - mann , en vev kultur hette , 37 - grader Celsius og 32 - graders Celsius inkubatorer , og en Eppendorf sentrifuge . Forsyninger inkluderer vevskulturplater , en engangs Pasteur pipette , kvalifisert retroviral supernatant , filter - steriliseres polybrene og filter - steriliseres protamin sulfat .
Klar Cell for infeksjon

Prior av infeksjon, må målceller være delt i en vev - kultur -plate og inkubert over natten i en 37 - grader Celsius inkubator med fem prosent CO2. Hensikten med inkubasjonstiden er å skape celler som er 50% konfluent . Forberedelse av cellene på forhånd er nødvendig å sikre at cellene er optimalisert for infeksjonen prosessen . The Nolan Lab ved Stanford University anbefaler at celle infeksjon alltid begynne start ved å infisere NIH 3T3 celler for å optimalisere resultatene av testen .
Infisere celler

Etter inkuberings-perioden er avsluttet, kan forskere at cellene er både friske og av den høyre løpet . Ved hjelp av hetten vev - kultur, blir det cellulære materiale aspirert , og en viral supernatant er brukt til cellene. Når anvendt, skal platen være rystet forsiktig frem og tilbake for å sikre at den er jevnt fordelt . Celler bør da være spin- inokulert ved å plassere dem i Eppendorf sentrifuge og spinne dem på 2500 rpm i nitti minutter ved en temperatur på 30 grader Celsius. Etterpå må cellene bli inkubert ved 32 ° C i en til to dager. Viruset blir deretter erstattet med de utpakkede celler og plasseres i inkubatoren til å bli analysert alt fra tre til syv dager etter den første infeksjonen .