N terminal sekvense Protocol

Edman degradering - en velkjent fremgangsmåte for identifisering av den N-terminale aminosyre i et protein - krever spalting av amino -syre , etterfulgt av identifisering ved hjelp av kromatografi eller elektroforese. Automatiserte prosesser akselerere N- terminal sekvensering. Fakta

Proteiner produsert inne individuelle cellene fungerer som hormoner , enzymer og andre viktige regulatorer . Genetisk mutasjon som resulterer i en unormal protein kan ha alvorlige helsekonsekvenser .
Prosess

Den N -terminale amino -syre spaltes ved behandling med en av flere reagenser , og deretter hydrolyseres for å danne en separat aminosyre. Tynnsjiktskromatografi , HPLC eller elektroforese bestemmer størrelsen av aminosyren , og sammenligner den med en kjent standard størrelse . Den nye N - terminal ende av den resterende protein kan være like spaltes for identifikasjon .

Automatisering arkiv

Applied Biosystems ledet utviklingen av automat Edman degradering , som binder et renset protein til en membran , og behandler den med phenylisothiocyanate . Den frie aminosyre er automatisk injisert inn i et HPLC -system for identifikasjon.
Arkiv Komplikasjoner

Proteiner må bli relativt rent og fritt for forurensninger for å nøyaktig bestemme den N -terminale aminosyre . Edman degradering grenser krever store proteinmolekyler fragmentert i små peptidkjeder ikke lenger 50 aminosyrer .