Antistoff merking Prosedyrer

Antistoff merkingsprosedyrerer teknikker som benyttes i de biologiske vitenskaper å påvise nærvær av spesifikke molekyler. Disse fremgangsmåtene gjør bruk av forholdet mellom et antigen og antistoff. Antigener kan være ethvert molekyl som immunsystemet gjenkjenner . Et antistoff er et Y -formet protein som spesifikt gjenkjenner et enkelt antigen. Biologists bruke bindingen forholdet mellom et antistoff og antigen for å bestemme plasseringen av en bestemt molekyl i en prøve. ELISA

ELISA , eller enzym -linked immunosorbent assay , er et biologisk laboratorieteknikksom brukes for å påvise tilstedeværelse av et antigen eller antistoff. Det er ofte brukt i medisinsk diagnose for å fastslå om en pasient har vært utsatt for en bestemt type infeksjon .

Å utføre en ELISA , prøven — med antigen av interesse — er forankret til en solid støtte i en skål . En løsning med den komplementært antistoff som tilsettes til fatet, og antistoffet binder til antigenet . Overskudd av antistoff blir deretter vasket bort, slik at bare de antigen-antistoff -bundet parvis i formen . Dette kan visualiseres ved tilsetning av et fluorescerende molekyl som binder seg til antistoffet , og avgir et visuelt signal, som så kan kvantifiseres . På denne måten kan tilstedeværelsen og mengden av det antigenet av interesse være indirekte bestemmes .
Western Blot

En Western blot er en annen type teknikk som brukes til å oppdage et bestemt protein i en prøve og bestemme dets størrelse . Først blir prøveproteinerfordelt etter størrelse på en gel ved hjelp av gel -elektroforese . På dette punktet , proteiner er ikke synlig for det blotte øye . Forskere deretter overføre proteinene til en membran , og tilsett en løsning inneholdende antistoff til antigenet av interesse. Etter å ha vasket bort overskudd av oppløsning , er antistoffet bindes til antigenet på membranen .

Legge et sekundært antistoff som fører til den opprinnelige eller primære , antistoff for å sende ut lys . Kvantifisere mengden lys som slippes tillater forskerne å fastslå tilstedeværelse av antigenet , dens størrelse i forhold til andre proteiner og dens relative konsentrasjonen .
Immunohistokjemi

Immunohistokjemi er en teknikk som gjør det mulig for forskere å visualisere plasseringen av et protein i en vevsprøve . Små skiver av en prøve fremstilles og et primært antistoff , som er festet til antigenet av interesse, tilsettes. Overskudd av oppløsningen blir vasket bort før forskere til et sekundært antistoff . Dette antistoffet er festet til det primære antistoff -antigen- par og sender ut lys , signaliserer plasseringen av antigenet av interesse.

Forskere bruke et mikroskop for å visualisere hvor antigenet er i cellen. Flere forskjellige antistoffer , som hver er spesifikke for et bestemt protein, kan anvendes til å bestemme den relative plassering av flere molekyler i en celle. Hvis dette er målet , er forskjellige fargede sekundære antistoffer som brukes til å skille mellom de forskjellige molekyler av interesse .
Flowcytometri

fluorescens - aktivert celle sortering — eller FACS — er en type flowcytometri brukt for å skille mellom forskjellige typer av celler i en løsning. Hver annen type celle er " merket " med et antistoff som er spesifikk for den celletype. Hvert av disse antistoffer avgir en annen farge av lys. En maskin agitates løsningen for å dele det opp i individuelle dråper , og bruker en sensor for å detektere farge på hver dråpe . Maskinen sorterer cellene ved å slippes ut fargen , dele dem basert på den type av protein de inneholder . FACS metodikk tillater forskerne å sortere og kvantifisere celler av interesse for sine forskningsspørsmål .
Immuno - Elektronmikros

Normal elektronmikroskopitillater forskere å undersøke strukturen i en celle forstørret opp til 1 million ganger . Immuno - elektronmikroskopi benytter egenskapene til antistoff -antigen- binding til å visualisere bestemte proteiner i meget tynne vevssnitt . Først blir antistoffer med festet gullpartikler tillates å binde seg til antigenet av interesse. Et elektronmikroskop , og visualiserer gullpartiklene, noe som gir forskerne et bilde av hvor er lokalisert proteinet i cellen.

Selv om immuno- elektronmikroskopi er enkel i teorien , er det teknisk vanskelig og meget kostbare å anvende , som begrenser sin popularitet av bruk i mange biologiske forskningsprogrammer .