Helse og Sykdom
ekspresjon av proteiner er svært enkelt produksjon av et protein fra en definert aminosyresekvens , som igjen er bestemt av en definert gensekvens . Forstå disse sekvenser tillater en undersøker for å modifisere et protein på ulike måter - for eksempel ved å plassere et fluorescerende merke på proteinet slik at det kan påvises , eller ved å fjerne partier av det protein som kan forstyrre dens framstilling eller behandling av en celle .
metoder og verktøy for analyse av Protein Expression
Protein uttrykket er analysert ved hjelp av svært avanserte og spesialiserte teknologier og prosedyrer, for eksempel ELISA , Immunoassays , massespektrometri , og bildebehandling . I de fleste tilfeller proteinet er indirekte detektert - for eksempel ved å bruke et antistoff som binder seg til det, og deretter ved hjelp av en sekundær deteksjonssystem for å visualisere det . En grunnleggende protein deteksjonsteknikker det av Western blotting , hvor et protein som er drevet gjennom en agarosegel og deretter overført til en membran. Den ble deretter " analysert " ved å tillate at et antistoff til å binde seg til det, og antistoffet blir deretter omsatt med en kjemisk oppløsning , slik som en sølvfarge , for å produsere et bilde av proteinet befinner seg på blot . Dette gir en indikasjon på størrelsen av proteinet , og om det er til stede som flere eller enkle enheter . En annen mye brukt metode er fluorescerende gjenkjenning. Bindingen av et antistoff merket med et fluorescerende partikkel til protein vil tillate det å bli visualisert ved mikroskopi .
Hensikten med Analysere Protein Expression
Studerer ekspresjon av et protein som gir en undersøker en indikasjon på hvor den blir produsert (dvs. uttrykket mønster og lokalisering ) eller dets mengde ( dvs. dens vev eller cellulære nivåer ) . Denne informasjonen brukes i diagnostisk patologi , for eksempel, til påvisning av urinproteinbestemme om en pasient har nyresykdommer slik som renal tubulær sykdom eller diabetisk nefropati. I genetiske laboratorier genet kloning eksperimenter vanligvis genererer rekombinant ( genmanipulert ) proteiner . Analysen av disse syntetiske molekylene er avgjørende for å verifisere gensekvenser eller kontroll for mutasjoner som kan eller ikke kan være ønskelig . For eksempel vaksiner er proteiner produsert av kunstig modifiserte enheter av gener. Disse proteinene må analyseres nøye for å sikre at genene ble endret i riktig og ønsket måte , slik at man unngår uønsket side eller toksiske effekter .
Protein Expression Analysis ved Western Blotting
analyse av protein ekspresjon ved hjelp av western -blotting er en meget rutinemessig utført laboratorieprosedyre for for forskere å evaluere gen -kloning og rekombinant proteinproduksjon . For eksempel, i molekylær biologi og genetisk engineering, har gener fra forskjellige arter (slik som mus og menneske ) sammenføyd og plassert inn i en bakteriecelle , som er i stand til å uttrykke proteinet. For å sikre at den riktige protein blir generert , må dens ekspresjon bli analysert ved western blotting . Western blotting er også brukt i medisinsk patologi å diagnostisere kugalskap og HIV .
Protein Expression Analysis av flowcytometri
Flowcytometri krever celler til å bli farget med en fluoriserende antistoff , som binder seg til et protein som uttrykkes på overflaten av , eller inne i , i en celle . Den brukes i farmasøytisk forskning for å finne molekyler ( cytokiner) som er unike for et bestemt sett av celler og er involvert i celle signalisering og kommunikasjon . Dette er viktig slik at effekten av legemidler på normal celle fysiologi og funksjon kan overvåkes under legemiddelutvikling og kliniske studier .