TPA Rensing Protocols

vevsplasminogen- aktivator eller TPA er en type serinprotease , som er proteinet i stand til å ødelegge blodpropper . TPA er funnet i cellene som innvendig dekker blodkarene . TPA- protokoller er en del av den farmasøytiske og medisinske forskning på slag, så vel som hjerte-og lunge- sykdommer, så som pulmonær embolisme og hjerteinfarkt . TPA rensing refererer til isolering av dette protein fra andre molekyler gjennom en rekke prosesser , inkludert kromatografi og elektroforese. Rensing av TPA fra Hog Kidney

Denne protokollen blir brukt i studier av fibrinolyse , under løsbrekking av produktet fra koagulering kalt fibrin, er relatert til dannelsen av tumorer. Teknikere trekke TPA fra aceton - tørket hog nyre med kalium acetat buffer , ved pH 4,2 . Deretter legger de ammoniumsulfat å indusere celle nedbør . De legger n -butyl- sefarose til prøvene , som deretter ble analysert på en chromatographer . Concanavalin A er også lagt til og chromatograph.y å skille forskjellige proteiner er utført .
Rensing av TPA fra kinesiske hamstere og E. coli- Cells

Protein renhet er en viktig faktor i suksessen til biologiske eksperimenter . Renset TPA er også kommersielt tilgjengelig, for derved å spare tid og unngå risikoen for å ødelegge eksperimentet på grunn av dårlig renset løsning. Denne protokoll omfatter renseprosessene av TPA i pattedyr -og bakterieceller. Teknikere utløse celleprøver , filtrere dem og utføre affinitet og gel kromatografi analyse . Senere , de analyserer og sammenligner resultatene , før kommersiell produksjon .
Expression of Active Menneskelig TPA i E. coli

avklart cellelysater legges til en lysin - Sepharose -kolonnen , analysert i et chromatographer og vasket med en oppløsning av natriumklor. En annen prøve er lastet opp på en annen kromatografikolonne inneholdende proteiner som bindes til TPA med meget høy affinitet. En prøve fra den andre kolonnen er blandet med en oppløsning av sink - sepharose . Den resulterende protein viser mer enn 90 prosent renhet , ifølge tidsskriftet " Applied and Environmental Microbiology . "