Den første komponenten lagt til en Gram stain lab er den primære flekken . Denne beis er vanligvis en form for fiolett fargestoff, slik som krystall- , metyl -eller Genetian fiolett. Hensikten med dette fargestoff er å endre fargen av bakteriecellene . Imidlertid er denne komponent som ikke brukes alene . Etter at denne komponent tilsettes til cellene, må den andre komponenten også tilsettes før innledende observasjoner. Uten den andre komponenten, er fargestoffet mindre tilbøyelige til å farge cellene.
Jod
Samtidig fargestoff blir tilsatt til cellene, laboratorieteknikerogså tilfører jod til blandingen . Den jod fungerer med fiolett fargestoff til å skape et sterkere grep om cellene som beholder farge . I denne fasen av testen , vil alle celler skaffe den lilla - brun farge på fiolett - jod blanding . På dette punktet , er det lite differensiering mellom en test som er positiv versus en som er negativ .
Etylalkohol eller Aceton
Etter cellene har vært farget med kombinasjonen av fiolett fargestoff og jod, etyhl alkohol, aceton eller en kombinasjon av de to er overført til decolorize cellene. I celler som er negative, oppløser decolorization løsning ytre fettlaget av cellene. Fordi bare det ytre laget av alle cellene absorberer fargestoff, blir eventuelle negative celler ble vasket fri for farge, med denne løsningen. Men Gram-positive cellene opprettholde sin lilla - brun farge fordi løsningen tørker cellene , lukker porene gjennom som fargestoff kan unnslippe .
Counterstain
Ulike laboratorier bruker forskjellige typer counterstain som den siste komponenten av en Gram flekktest. Noen laboratorier bruker fuchsin , mens andre bruker safranin stedet . Imidlertid skaper fuchsin en mørkere og mer lett synlig farge , og blir ofte foretrukket. Hensikten med denne andre fargestoff er å slå eventuelle negative celler i et rosa farge i stedet for det purpur - brunt fra fiolett fargestoff og jod kombinasjon . Dette hjelper laboratoriet tekniker for å se forskjellene tydelig mellom de to typer celler . Når lab tekniker administrerer counterstain , kan han skille mellom de to cellene , samt se størrelse og form klart .