Katarina av Aragon døde av kreft, selv om den eksakte typen kreft ikke er kjent. Hun hadde lidd av dårlig helse en tid før hennes død, og hadde blitt behandlet for en rekke plager, inkludert et hovent kne og hoste. I de siste månedene av livet ble hun stadig svakere og skrøpelige, og gikk til slutt bort 7. januar 1536.