Perfusjon Technique

Perfusjonen teknikk gir rask og jevn fiksering til alle individuelle celler i vev . 4 prosent paraformaldehyd fiksativ blir ført gjennom det vaskulære system til å oppnå vev av interesse. Hoved målområde for legemiddeladministrering i en bestemt organ , kan identifiseres ved hjelp av denne teknikken. Perfusjon har også hjulpet forskere til å forstå den strukturelle og funksjonelle organiseringen av den menneskelige hjerne . Hva du trenger , Animal ( rotte eller ape )
Perfusjons pumpe , beger
Fixative ( 4 prosent paraformaldehyde ) arkiv sprøyte nåler
Perfusjons drypp satt
saks arkiv Scalpel
tang arkiv 0,9 prosent saltvann
Ice boksen på
Vis flere instruksjoner
en

Forbered frisk 4 prosent paraformaldehyde ved å blande 40 g paraformaldehyde i 800 ml vann . Varm opp løsningen til 60 C under omrøring . Avkjøl løsningen til 4 C. Juster pH til 9,5 ved hjelp av et pH-meter . For å justere pH , legge iseddik å oppnå ønsket pH
to

Sett opp perfusjonspumpeanordningen ; . Feste alle glassdeler og en perfusjon nål . Løpe 100 ml vann fra springen gjennom røret av perfusjon pumpe for å fjerne rester fra glassdelene . Plasser et beger av fiksativ i en isboks .
3

Åpne slutten av perfusjon røret og legg den i en fiksativ beger. Scale volumet av løsningen i henhold til størrelsen av dyret. Nå justere perfusjon pumpeventilentil en langsom, jevn drypp. Lukk ventilen . Fyll perfusjon apparat med 0,9 prosent ( vekt /volum ) saltvannsoppløsning .
4

Sett opp kirurgi instrumenter nær operasjonsbordet . Gi en anestesi injeksjon til dyr i henhold til kroppsvekt ( 0,5 mg ketamin /kg). Plasser dyret på operasjonsbordet med ryggen ned .
5

Lag et snitt med en skalpell , langs lengden av mellomgulvet . Med de store saks, butte side ned , skåret bindevev ved bunnen av diafragmaet . Expose hjertet . Hold det bankende hjertet med pinsett og sette inn en nål inn i venstre hjertekammer .
6

Åpne ventilen perfusjonspumpeanordningen til at strømmen av 0,9 prosent saltløsning. Sørg for at løsningen flyter fritt og dyret er i live . Hjertet av dyret bør være kontinuerlig juling . Etter at blodet er blitt erstattet med en saltoppløsning , å endre oppløsningen til 4 prosent paraformaldehyd .
7

Stopp perfusjon og disseksjon av et vev av interesse. Hold vev i samme medium på 4 C.