Kan du bruke serum til å utføre en western blot?

Selv om det er mulig å bruke serum til å utføre en Western blot, anbefales det generelt ikke. Serum er en kompleks blanding som inneholder celler og proteiner, inkludert de som kan forstyrre påvisningen av spesifikke proteiner av interesse. I tillegg kan serum ha et høyt bakgrunnssignal, noe som kan gjøre det vanskelig å oppdage proteiner med lav overflod. Av disse grunner brukes rensede proteinprøver vanligvis i Western blots.

Imidlertid kan det i visse tilfeller være nødvendig eller fordelaktig å bruke serum for Western blotting. For eksempel, hvis proteinet av interesse er tilstede i lav overflod i den rensede proteinprøven, kan bruk av serum øke sjansen for å oppdage proteinet. I tillegg kan serum brukes til å studere protein-protein-interaksjoner eller for å oppdage antistoffer mot spesifikke proteiner.

Hvis serum må brukes til Western blotting, er det viktig å ta skritt for å minimere potensialet for interferens og bakgrunnssignal. Disse trinnene kan omfatte:

* Klargjøring av serumprøven ved sentrifugering for å fjerne cellulært rusk og uløselige partikler.

* Fortynning av serumprøven for å redusere konsentrasjonen av forstyrrende stoffer.

* Bruke et blokkeringsmiddel, slik som bovint serumalbumin (BSA), for å minimere uspesifikke interaksjoner.

* Optimalisering av Western blotting-forholdene, slik som antistoffkonsentrasjoner og inkubasjonstider, for å redusere bakgrunnssignalet.

Generelt, mens bruk av serum for Western blotting generelt ikke anbefales på grunn av potensialet for interferens og bakgrunnssignal, kan det være nødvendig eller fordelaktig i visse tilfeller. Nøye optimalisering av Western blotting-forholdene er avgjørende ved bruk av serum.