Hvordan måle Catalase Konsentrasjoner

Katalase er en biologisk ( organisk ) katalysator . Dette enzym er en av de mest potente kjente katalysatorer og har gunstige virkninger på menneskekroppen og er avgjørende for liv. Katalase fungerer som en katalysator i påskynde nedbrytningen av hydrogenperoksid . Hydrogenperoksid er en metabolsk biprodukt som er giftig for cellene hvis det ikke fjernes . Katalase hjelper til å bryte ned hydrogenperoksyd til vann og oksygen. Katalase hjelpemidler også i oksyderende andre giftstoffer som for eksempel fenoler, maursyre , formaldehyd og alkoholer. Du trenger
To 110 ml kromogenløsningen i fosfatbuffer
300 mL underlaget - 30 % hydrogen peroxide
400 μL.HRP - pepperrotperoksydase i fosfatbuffer
60 ml fosfat buffer
250 ml prøve fortynning surfaktant i fosfatbuffer
To 30 ml substrat fortynningsmiddel fosfatbuffer
To 30 ml stop reagens - natriumazid
To ampuller 160 U /hetteglass standard catalase
spektrofotometer
10 mL justerbare pipetter
1 cm sti - lengde spektrofotometriske kyvetter
1,5 ml polypropylen mikrorør med cap
prøverør - 12x75 millimeter ( 2,5 ml hver )
Timer
Ion vann

Vis flere instruksjoner
en

Klargjør lager av katalase at du skal måle ved å legge til 200 mikroliter ( mL ) avionisert vann til catalase konsentrasjoner i 50 milliliter ( ml ) hetteglass . Nivået av catalese konsentrasjon bør være 160 enheter per milliliter ( U /ml).
2

Tilsett 30 pl av fortynnet katalase inn i rørene . Til 500 pl av substratet ( hydrogenperoksid - 10mm H2O2) i hvert rør . Vær forsiktig så du ikke å sprute hydrogen peroxide når du arbeider med det .
3

Inkuber hvert enkelt rør i ett minutt ved romtemperatur .
4

Legg 500 μ L av reagens til hver ampulle . Cap hvert hetteglass og bland ved å snu hetteglasset opp og ned . Ikke virvle blandingen , riste flasken eller røre det med en gjenstand .
5

Legg 20 mL av hver reaksjonsblandingen inn i reagensglass. Tilsett 2 ml av HRP- reagens i hvert prøverør . Igjen , bland løsningen ved å snu prøverør flere ganger .
6

Inkuber løsningen på nytt , denne gangen i 10 minutter ved romtemperatur .
7

Les absorbans nivået av oppløsningen med et spektrofotometer . Spektrofotometer måler lyset bølgelengder for å finne ut nøyaktig hvilke stoffer som finnes, og og hva konsentrasjoner . Denne fremgangsmåte vil gi en nøyaktig avlesning av catalase konsentrasjoner. Informasjonen er nyttig i sammenheng med samspillet av katalase med hydrogenperoksid , som i dette eksperimentet , og som foregår naturlig i menneskekroppen.